[发明专利]抑制S100A9基因表达的siRNA及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，具体是涉及抑制S100A9基因表达的siRNA及其在抑制鼻咽癌细胞CNE1迁移功能中的应用。

背景技术

鼻咽癌(Nasopharyngeal carcinoma NPC)是一种来源于鼻粘膜上皮细胞的恶性肿瘤，95％以上属于未分化癌类型，恶性程度高、生长快，容易出现淋巴结或血道转移，因此大多数的鼻咽癌患者都死于肿瘤的转移而并非原发灶。近年来随着分子生物学及其技术的飞速发展，鼻咽癌的发生发展及其生物学行为已取得较大进展。多项研究表明，S100A8和S100A9参与肿瘤的发生发展，已有研究利用iTRAQ蛋白定量标记结合MALDI-TOF-MS质谱技术筛查鼻咽癌相关生物标志物时发现，鼻咽癌患者血浆中S100A8蛋白质和S100A9蛋白质的表达水平明显高于健康人群。

S100A8蛋白(Calgranulin A蛋白、MRP8蛋白)与S100A9蛋白(CalgranulinB蛋白、MRP14蛋白)均属于低分子量(分别为11kDa和14kDa)、氨基末端EF-1和羧基末端EF-2手型结构、钙结合蛋白S100蛋白家族成员，两者常以钙离子依赖性方式形成异源二聚体S100A8/A9蛋白复合物。近年来研究发现，两者在多种原发和浸润性肿瘤，包括胃癌、结肠癌、胰腺癌、膀胱癌、卵巢癌、甲状腺癌、乳腺癌、皮肤癌、鼻咽癌中表达上调。

癌症的杀伤力主要是因为癌细胞侵入周围组织并能进入血液或淋巴系统而进行远端转移。Saha等报道，用0.2-1μg/ml S100A8/A9处理B6F10黑色素细胞，可引起与肿瘤细胞侵袭和迁移有关的基质金属蛋白酶MMP的表达，促进细胞的迁移。而关于内源性S100A8/A9的研究，Yong等报道，肿瘤细胞自身表达的S100A8/A9也具有引起肿瘤细胞侵袭和迁移作用。

近年RNA干扰技术迅速发展，不仅广泛用于肿瘤基因治疗，而且也是研究基因功能的有用工具。因此通过研究设计S100A8siRNA、S100A9siRNA降低鼻咽癌细胞CNE1内S100A8/A9的表达，从而抑制鼻咽癌细胞的迁移，具有重要的临床意义，但目前还没有关于抑制S100A8、S100A9基因表达的siRNA的相关报道。

发明内容

本发明的发明目的在于提供抑制S100A9基因表达的siRNA，并进一步提供该siRNA在临床上的应用。

本发明的目的通过以下技术方案实现：

提供抑制S100A9基因表达的siRNA，其序列为：

正义链:5'-GCUUCGAGGAGUUCAUCAU-3'(SEQ ID NO.5)

反义链:5'-AUGAUGAACUCCUCGAAGC-3'(SEQ ID NO.6)

优选地，上述S100A9siRNA序列的3'端垂悬两个dTdT，该垂悬不与mRNA序列互补，使正义链3'端更容易解链，从而增加其沉默效率。

上述S100A9siRNA序列可用于制备治疗鼻咽癌的药物。

本发明具有如下的优点：

(1)本发明提供的抑制S100A9基因表达的siRNA，能有效沉默S100A9基因，下调S100A9基因的表达。

(2)通过下调S100A9基因的表达，研究其对鼻咽癌细胞CNE1中MMP7基因表达和细胞迁移功能的影响，发现S100A9siRNA对MMP7基因的表达有一定的抑制作用，可使鼻咽癌细胞迁移功能减弱，因此可以将其应用在治疗鼻咽癌药物的研究中。

附图说明

本发明将通过例子并参照附图的方式说明，其中：

图1为体积比Lipofectamine 2000：siRNA＝1:3的siRNA转染效率图。

图2为荧光定量PCR检测阳性对照组(GAPDH)、阴性对照组(N.C.)中GAPDH基因的表达水平图。

图3为荧光定量PCR检测S100A9siRNA1组、S100A9siRNA2组、S100A9siRNA3组、阴性对照组(N.C.)中S100A9基因的表达水平图。

图4为荧光定量PCR检测S100A9siRNA3组、空白对照组、阴性对照组(N.C.)、脂质体对照组中S100A9基因的表达水平图。

图5为荧光定量PCR检测S100A9siRNA3组、空白对照组、阴性对照组(N.C.)、脂质体对照组中MMP7基因的表达水平图。