[发明专利]从藏药细果角茴香中提取分离四种生物碱的方法

说明书

技术领域

本发明涉及从藏药细果角茴香中提取分离四种生物碱的方法。

背景技术

藏药角茴香(Hypecoum leptocarpum Hook.f.et Thoms)为罂粟科角茴香属植物，别名咽喉草、山黄连或野茴香等，藏药名为巴尔哇打、巴尔巴达。生长于海拔4300m以下的草原、草甸、砂砾地上，味苦性凉，清血热、温热和毒热。《西藏常用中草药》称其有解热镇痛、消炎解毒之功效，可治伤风感冒、头痛、四肢关节疼痛、胆囊炎，并解食物中毒。《陕甘宁青中草药选》中称：细果角茴香能治流感、咽喉肿痛、目赤等症。现代分析化学和天然产物化学研究发现：细果角茴香中含有多种生物碱成分，如：原阿片碱、隐品碱、血根碱等。

细果角茴香生物碱是从细果角茴香全草中提取得到的生物碱。通过查阅文献，发现还没有对其活性成分进行系统研究。根据同属植物的研究发现，该属植物的活性成分主要为生物碱。到目前为止只报道了使用传统的柱色谱法对细果角茴香中生物碱分离的报道。

高速逆流色谱(High-speed counter-current chromatography，简称HSCCC)分离技术是一种连续高效的液-液分配色谱分离技术，它不用任何固态的支撑物或载体，利用两相溶剂体系在高速旋转的螺旋管内建立起一种特殊的单向性流体动力学平衡，其中一相作为固定相，另一相作为流动相，在连续洗脱的过程中能保留大量的固定相，物质的分离依据其在两相中分配系数的不同而实现，特别适合于天然产物活性成分的分离。

目前还未见有人使用HSCCC技术对细果角茴香中的生物碱进行分离纯化。

发明内容

本发明的目的在于提供一种利用HSCCC技术从藏药细果角茴香中提取分离四种生物碱的方法。

具体地，本发明提供了从藏药细果角茴香中提取分离四种生物碱的方法，它包括如下操作步骤：

(1)粗提物的制备：

取细果角茴香，用70％-95％v/v乙醇为溶剂提取，提取液浓缩除去乙醇后，所得浸膏加盐酸，除去不溶物，溶液脱脂后，加碱调节pH至9-10，再用氯仿萃取，收集氯仿层，除去溶剂后，干燥得到生物碱粗提物；

(2)采用高速逆流色谱法分离：

取氯仿-甲醇-0.1M HCl＝4∶3∶2，置于分液漏斗中配制两相溶剂系统，取下相为固定相，上相位流动相；将固定相充满逆流色谱的色谱柱，在25-28℃下，主机正转，转速为800-900r/min，然后以1.5-1.8mL/min的流速泵入流动相，至两相溶剂在柱中达到平衡状态；步骤(1)制备的粗提物，以流动相为溶剂溶解，制备样品溶液；将样品溶液进样，在紫外检测器下分别接收各目标成分，即可分别得到leptopidine，oxohydrastinine，(-)-N-methylanadine，N-Feruloyltyramine。

本发明分离得到的leptopidine，oxohydrastinine，(-)-N-methylanadine，N-Feruloyltyramine，是指纯度大于92％的leptopidine，oxohydrastinine，(-)-N-methylanadine，N-Feruloyltyramine。

已有研究发现，这类生物碱有抗炎，镇痛，抗病毒的活性。

本发明一个具体实施方式中，色谱分离时的温度为25℃，转速为850r/min，流动相泵入速度为1.6mL/min。

进一步地，步骤(1)中，乙醇浓度为95％v/v，提取温度为50-70℃，例如60℃。

进一步地，步骤(1)中，盐酸的加入量为浸膏体积的4倍，盐酸体积分数为2％。

进一步地，步骤(1)中，脱脂处理是采用石油醚或氯仿萃取实现。本发明一个具体实施方式中，采用石油醚进行脱脂处理，石油醚沸程60-90℃。

进一步地，步骤(1)中，所述碱为氨水。

进一步地，步骤(2)中，紫外检测波长为280nm。

进一步地，步骤(2)中，粗提物用量为200mg。

进一步地，步骤(2)中，将样品溶液进样，在紫外检测器下分别接收出峰时间100-300min内的各目标成分，即可分别得到leptopidine，oxohydastinine，(-)-N-methylanadine，N-Feruloyltyramine。