[发明专利]MRE11基因突变检测体系及其试剂盒

说明书

技术领域

本发明设计涉及一种基因突变的检测产品以及该产品所用到的特异性引物，属于生物技术领域。

背景技术

生物体基因组DNA会时常受到一系列内源或外源DNA损伤试剂的作用而出现DNA断裂，包括双链断裂（Double Strains Breaks,DSB）和单链断裂（single- strand breaks,SSB）。如果DNA双链断裂不能得到及时有效地修复，会导致基因组不稳定性，如染色体缺失，易位，染色体融合、多拷贝染色体等，引起多种人类疾病，甚至癌症的发生。正常情况下，生物有机体形成了一系列DNA损伤修复机制，以应对损伤的DNA。MRN复合物进化上高度保守，是参与DNA损伤修复的一个关键分子，由MRE11、NBS1和RAD50蛋白组成,是最先识别DNA双链断裂并发出信号的反应子，在DNA复制、DNA损伤修复以及细胞周期检验点的信号传导中发挥着至关重要的作用。MRN探测DNA损伤（DNA双链是否断裂）的情况，并在探测到DNA损伤信号后将把这个信息传递给一系列蛋白激酶，包括ATM（ataxia telangiectasia mutated，毛细血管扩张性共济失调症突变）激酶、ATR（ATM-Rad3-Related，共济失调性毛细血管扩张和Rad3-相关性）激酶和DNA-PKcs(catalytic sunbunit of the DNA-dependent protein kinase,正DNA-蛋白激酶),这些激酶磷酸化靶蛋白从而介导修复，如果损伤不能被修复则介导细胞发生凋亡。在这个过程中，MRE11不仅是DNA损伤的感受器，更是修复DNA的启动因子，还能修饰受损的DNA分子，在细胞周期检验点及DNA复制中都起重要作用。

MREll蛋白具有DNA结合、双链DNA3'-5'外切酶和单链DNA结构特异性内切酶活性等功能,在MRN复合物的结构和功能中处于核心地位。当人类的Mre11基因发生突变时,会导致共济失调性毛细血管扩张症样紊乱综合症(ataxia-telangiectasia-like disease，ATLD)，表现为发育迟缓、小脑退行性变、免疫缺陷和肿瘤易感等。由于MRE11在维持染色体稳定方面的重要作用，其与肿瘤的发生发展密切相关，已发现Mre11基因突变发生于多种肿瘤中。约82%的大肠癌中具有MRE11基因突变，研究发现一类称为PARP抑制剂的新型药物可以对抗MRE11基因突变型肿瘤。最新的研究还显示MRE11基因突变可作为肌肉浸润性膀胱癌（MIBC）放疗的不良预后因子。Mre11基因检测作为一个新的癌基因位点对于乳腺癌的防治也具有重要意义。所以，临床上准确快速判断患者是否存在Mre11基因的突变对于用药及防治策略选择具有重要意义。因此，开发一种检测Mre11基因热点突变的产品，以实现高灵敏度、低成本、方便快捷的Mre11基因突变检测是非常有必要的。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种可以覆盖多突变位点检测，且快速、准确、高灵敏度的MRE11基因突变检测体系及其试剂盒。

本发明为解决上述技术问题提出的一种技术方案是：一种MRE11基因突变检测体系，包括用于检测MRE11 A390G_1328C>G突变位点的正向检测引物MRE1F和反向检测引物MRE1R，以及用于检测MRE11 P631T_2050C>A 突变位点或MRE11 R633Q_G2057G>A突变位点的正向检测引物MRE23F和反向检测引物MRE23R；

所述MRE1F的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；

所述MRE1R的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；

所述MRE23F的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示；

所述MRE23R的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示。

上述技术方案的一种优选是：上述MRE11基因突变检测体系还包括阴性对照和阳性对照；

所述阴性对照分别是针对检测MRE11 A390G_1328C>G突变位点的野生型对照一和针对检测MRE11 P631T_2050C>A 突变位点或MRE11 R633Q_G2057G>A突变位点的野生型对照二；

所述阳性对照分别是针对检测MRE11 A390G_1328C>G突变位点的突变型对照一、针对检测MRE11 P631T_2050C>A 突变位点的突变型对照二和针对检测MRE11 R633Q_G2057G>A突变位点的突变型对照三。