[发明专利]同时诱导扩增Vα24+iNKT细胞和CD3‑CD56+NK细胞的方法

权利要求书

1.一种同时诱导扩增Vα24⁺iNKT细胞和CD3^-CD56⁺NK细胞的方法，其特征在于，步骤为：第0天，取外周血，用淋巴细胞分离液分离出PBMC，将分离得到的PBMC用第一培养基调整PBMC浓度为2×10⁶/mL,制成PBMC细胞悬液，然后往PBMC细胞悬液加入终浓度为500ng/mL的Anti-CD16抗体、终浓度为500ng的α-GalCer、终浓度为1000U/mL的IL-2、终浓度为15ng/mL的IL-18和终浓度为20ng/mL的IL-21，之后转入培养瓶中于37℃、5％CO₂、100％湿度条件下开始培养，所述第一培养基为含自体血浆的无血清培养基；

第1天，细胞培养24小时后加入50ng/mL的Anti-CD3抗体，在37℃、5％CO₂、100％湿度条件下培养；

第3天，在细胞培养液中补加一半体积的第二培养基，所述第二培养基为含5体积％的自体血浆、终浓度为1000U/mL的IL-2、终浓度为15ng/mL的IL-18、终浓度为20ng/mL的IL-21的无血清培养基；

第5天，离心收集细胞，并用含5体积％的自体血浆、终浓度为1000U/mL的IL-2、终浓度为15ng/mL的IL-18、终浓度为20ng/mL的IL-21的无血清培养基将细胞重悬并调整细胞浓度至1.5×10⁶/mL，转移至G-REX 100L细胞培养装置中；

继续培养和收获：

以后每隔2天取样计数细胞，根据计数结果往所述细胞培养装置中补充含5体积％的自体血浆、终浓度为1000U/mL的IL-2、终浓度为15ng/mL的IL-18、终浓度为20ng/mL的IL-21的无血清培养基，调整细胞密度为1.5×10⁶/mL，37℃、5％CO₂、100％湿度条件下连续培养至14～21天后，离心收集获得的Vα24⁺iNKT细胞和CD3^-CD56⁺NK细胞。

2.根据权利要求1所述同时诱导扩增Vα24⁺iNKT细胞和CD3^-CD56⁺NK细胞的方法，其特征在于，在所述继续培养和收获的步骤中，细胞达到5×10⁹时，离心收集获得的Vα24⁺iNKT细胞和CD3^-CD56⁺NK细胞。