[发明专利]一种分离可代谢粗榧生物碱菌株的方法

权利要求书

1.一种分离可代谢粗榧生物碱菌株的方法，选取多年生粗榧的根、茎、叶作为外植体，经切条、灭菌后放入培养基中培养使其长出粗榧共生菌，然后对粗榧共生菌按照菌种不同进行分离并分别培养发酵，将发酵液浓缩后进行检测以确定其是否为可代谢粗榧生物碱菌株，其特征在于：所述培养发酵的具体操作方法为将粗榧共生菌活化后放入温度为26℃的环境中培养48h，根据不同菌种的菌落特征鉴定出各菌种，再将各菌种分别接种到装有PDA培养基的培养皿上培养，待菌种产生代谢生物1-2天后接入第二批菌种，以促进第二批菌种的生长，第二批接种的菌种长出后接种到装有发酵培养基的摇瓶内，然后把摇瓶放入转速为200r/min、温度为28⁰C的摇床上培养5d，收集各菌种的发酵液即可；

所述发酵液浓缩的具体操作方法为将各菌种的发酵液分别放入转速为10000r/min的冷冻高速离心机中离心，收集上清液，把上清液放入转速为10000r/min的冷冻高速离心机中再次离心，然后把再次离心后的上清液放入温度为40-50℃、压强为0.05Mpa的旋转蒸发仪中浓缩至原体积的十分之一，再将各菌种的浓缩液分别放入温度为4℃的冰箱内即可。

2.根据权利要求1所述的一种分离可代谢粗榧生物碱菌株的方法，其特征在于：所述摇瓶内发酵培养基由土豆汁、葡萄糖、蛋白胨、可溶性淀粉、MgSO₄、KH₂PO₄和水制成，且各组分的质量百分比为土豆汁2%，葡萄糖2%，蛋白胨0.12%，可溶性淀粉1%， MgSO₄ 0.05%， KH₂PO₄ 0.15%，余量为水，培养基的pH=7；

所述土豆汁由组分A和组分B按照10:1的重量比混合后放入旋转蒸发仪中浓缩至原体积的三分之一后制得，所述组分A是将土豆切碎后放入温度为95-100℃的锅中蒸煮20-30min，取出后过100-200目筛，收集滤液制得；所述组分B是将土豆切碎后放入榨汁机中压榨，再把榨汁过80-100目筛，收集滤液制得。