[发明专利]一种快速鉴定食用向日葵杂交种SH363真实性和纯度的方法

说明书

本发明公布了一种快速鉴定食用向日葵杂交种SH363真实性和纯度的方法，通过在大量的SSR引物中筛选出SR‑366、SR‑495、SR‑1067和SR‑1079，并在上述引物下获得了适于以食用向日葵杂交种SH363及其亲本标准向日葵种子A436和R1843的基因组DNA为模板的PCR扩增反应的最优组合，对比通过凝胶电泳处理获得的食用向日葵杂交种SH363及其标准向日葵种子A436和R1843的电泳图谱，判定所述食用向日葵杂交种SH363真实性和纯度的鉴定，该方法方便、快捷，操作步骤简单，能够在短时间内对大量的待测食用向日葵杂交种SH363进行快速鉴定，测定结果准确。

技术领域

本发明属于农业分子生物学领域，具体涉及一种快速鉴定食用向日葵杂交种SH363真实性和纯度的方法。

背景技术

向日葵(Helianthus annuusL.)为菊科(Composicae)向日葵属的双子叶植物，向日葵属由51个种和19个亚种组成，其中多年生向日葵37种，一年生向日葵14种。向日葵原产于北美洲西南部，是唯一一种起源和驯化于北美洲并在全球范围内大面积栽培的作物。向日葵分为油用型向日葵和食用型向日葵，染色体基数均为17，有二倍、四倍、六倍不同倍数水平，其中栽培种为二倍体，属虫媒异花授粉作物，野生种在二倍、四倍、六倍等不同倍数水平均有发现。自上世纪60年代以来，向日葵在世界各地得到迅速发展，其油脂产量仅次于大豆。目前，世界上已有40多个国家种植，其中原苏联、阿根廷、东欧、美国、中国、法国、西班牙等七个国家和地区的向日葵栽培面积约占全球栽培面积的80％，2012年我国向日葵栽培面积达88.9万公顷，主要分布在内蒙古、新疆、东北、甘肃、宁夏、陕西、山西、河北等地，总产达232万吨。向日葵属喜光性短日植物，全生育期有效积温≥1800～2600℃；耐旱耐盐碱，耐瘠薄，对土壤有极广的适应性，最适宜的土壤为壤土和沙壤土。因此，在我国北方干旱、降雨少、土壤盐碱化严重的地区，向日葵成为当地农民脱贫致富、增产增收的经济作物。近几年来，我国对于向日葵的生产得到的长足的发展，已通过不同的方式从国外不断引进优良的杂交品种，目前我国已育成40多个油用杂交向日葵品种，市场上推广的杂交向日葵品种已有100余种。随着向日葵育种技术的不断发展和杂交品种的广泛推广，向日葵杂交种的真实性与品种纯度鉴定已越来越成为新品种保护以及保护种植户利益的必要手段。

传统的向日葵杂交种的真实性与品种纯度鉴定方法依靠田间小区种植鉴定方法，在苗期、蕾期、花期、灌浆期以及对收获后的种子等进行观测鉴定，主要依据向日葵的株、叶、花、种子的特征特性加以评价和判断。但上述鉴定方法存在如下缺陷：(1)受到经验的限制，没有完全一致的评判标准；(2)在向日葵生长期间的鉴定还容易受到气候与栽培条件的影响，引起误差或误判；(3)需投入大量的人力、物力，成本高、耗时长，时效性差，对市场与生产的指导不及时，难以避免给生产上带来的损失。

随着分子生物学技术的发展，分子标记技术越来越多的应用于农作物种子的真实性与品种纯度鉴定。分子标记鉴定技术是以DNA分子多态性为基础的一种遗传标记，能稳定遗传，可以反映生物的个体和群体特征。由于分子标记可以直接反映DNA水平上的差异，具有高度的专一性和特异性，用于鉴定种子纯度的分子标记主要的方法有RAPD、SSR和SCAR。其中SSR(simple sequence repeats)标记技术具有数量丰富、多态性高、共显性遗传、扩增稳定、易于检测等方面的优点，已在许多农作物遗传连锁图谱的构建、遗传多样性、标记和定位基因以及分子标记辅助方面的应用。SSR标记通常具有共显性的特点，F₁杂交种具有双亲等位基因的互补带型。鉴于不育系和其同型保持性遗传背景基本一致，只在不育基因、保持基因等特征基因上存在差异，据此特征基因选择DNA分子标记进行分析，从而实现有效地区别和鉴定。SSR标记已成为现阶段用于鉴定种子纯度的常用方法,已广泛应用于玉米、水稻、大豆的新品种纯度鉴定。但是目前在食用向日葵杂交种使用SSR分子标记技术鉴定其真实性和纯度的报道鲜有，建立一套适于食用向日葵杂交种真实性和纯度鉴定的SSR分子标记技术具有重要意义，可以克服传统的田间小区种植鉴定所带来的不足。