[发明专利]同步定量心肌标志物多指标的量子点标记试条及其方法

说明书

技术领域

本发明属于体外诊断领域，具体涉及一种同步定量心肌标志物多指标的量子点标记试条及其方法。

背景技术

急性心肌梗死是非常凶险的心脏疾病，病情变化急骤，在我国，每年有超过100万人被急性心肌梗死而夺去生命。心肌标志物检测是心血管疾病诊断和治疗的关键，不但可以降低病死率，对日后康复也起着至关重要作用。

目前，心肌标志物的血清检测主要采用血清ELISA方法。该方法需要离心机先分离血清，还需要孵育箱、酶标仪等医疗设备，操作过程复杂，每次只能检测一种指标，检测过程至少需要40-60分钟，且价格昂贵，无法满足全面高效的临床诊断要求。

样品多种组分同步检测（特别是多种组分同步快速定量检测）具有非常重要意义。传统上测定混合体系中样品多种组分含量，多采用平行单组分分析法，即每个分析流程只测定其中一种组分含量，多次平行执行该流程，最后得到所有所需组分含量。分析所需时间长，消耗试剂多，分析通量低，劳动量大。量子点（quantum dot, QD）荧光发光效率高，激发谱线范围宽，能“一元激发，多元发射”，发射谱线范围窄且对称，光漂白速度慢，荧光寿命长，粒径与生物分子相近，表面修饰后能多功能化，不同粒径和种类的量子点混合物产生的特征波长荧光光谱不交叠，非常适用于样品多组分分析。本发明公开一种同步定量心肌标志物多指标的QD标记试条及其方法，以解决血液样品心肌标志物多指标同步快速定量问题。

发明内容

本发明的第一个目的是公开一种同步定量心肌标志物多指标的量子点标记试条。本发明的第二个目的是公开所述试条的制备方法、标准曲线制作方法、以及用所述试条同步定量血液样品心肌标志物多指标的方法。

本发明上述目的是通过如下技术方案实现的：

所述的同步定量心肌标志物多指标的量子点标记试条，包括顺次搭接固定在底衬8上的样品垫1、红细胞滤膜2、标记垫3、分析膜7、吸水垫6。

所述标记垫3为玻璃纤维膜。所述分析膜7为硝酸纤维素膜、尼龙膜、或硝酸纤维素/醋酸纤维素混合膜，其上具有检测带（即T带）4和质控带（即C带）5。所述底衬8为聚脂或塑料板。

本发明采用双抗体夹心法。所述标记垫3包被有不同波长量子点对应标记的各心肌标志物抗体的混合物。所述分析膜7的T带4包被有各心肌标志物抗体的混合物。所述分析膜7的C带5包被有质控物二抗。

本发明所述试条的标记垫3的量子点包括ZnS、CdS、HgS、ZnSe、CdSe、HgSe、CdTe、ZnTe、ZnO、PbSe、HgTe、CaAs、InP、InAs、InCaAs、CdS/ZnS、CdS/Ag₂S、CdS/PbS、CdS/Cd(0H)₂、CdS/HgS、CdS/HgS/CdS、ZnS/CdS、ZnS/CdS/ZnS、ZnS/HgS/ZnS/CdS、CdSe/CdS、CdSe/ZnS、CdSe/ZnSe、CdSe/CuSe、CdSe/HgTe、CdSe/HgSe、CdSe/HgSe/CdSe、CdTe/HgS、CdTe/HgTe、InAs/InP、InAs/CdSe、InAs/ZnSe、MgS、MgSe、MgTe、CaS、CaSe、CaTe、SrS、SrSe、SeTe、BaS、BaSe、BaTe、CdS:Mn、ZnS:Mn、CdS:Cu、ZnS:Cu、CdS:Tb、ZnS:Tb中的任意一种或任意几种纳米粒子的组合，以及由上述任意一种量子点为核、二氧化硅为壳的核-壳型纳米复合粒子。

本发明所述同步定量心肌标志物多指标的量子点标记试条的制备方法包括下述步骤： 

A. 量子点偶联抗体：

a) 取不同波长量子点分别用磷酸缓冲液（PBS）调pH=6-9，加入EDC（l-(3-二甲基氨丙基)-3-乙基碳二胺盐酸盐）和NHS（N-羟基硫代琥珀酸亚胺）室温活化10-60min。

b) 分别对应加入各心肌标志物的相应抗体旋涡振荡反应0.5-3h。

c) 分别对应加入BSA封闭反应0.5-2h。

d) 离心纯化产物。

e) 取沉淀用PBS缓冲液重悬分散，4℃保存。

B. 试条组件制备：

a) 样品垫1:  选用纤维素膜切成一定规格的膜块，将该膜块放入含有0.1%-10%BSA和0.01%-10%Tween 20的PBS中浸泡，取出，干燥备用。

b) 红细胞滤膜2：选红细胞滤膜切成一定规格膜块，干燥备用。