[发明专利]一种(3R,5R)-6-氰基-3,5-二羟基己酸叔丁酯的生物制备方法在审
| 申请号： | 201410546518.5 | 申请日： | 2014-10-16 |
| 公开（公告）号： | CN104357502A | 公开（公告）日： | 2015-02-18 |
| 发明（设计）人： | 竺伟;张文明;吴会 | 申请（专利权）人： | 尚科生物医药（上海）有限公司 |
| 主分类号： | C12P13/00 | 分类号： | C12P13/00 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 201318 上海市浦*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 氰基 羟基 己酸 叔丁酯 生物 制备 方法 | ||
1.一种(3R,5R)-6-氰基-3,5-二羟基己酸叔丁酯的生物制备方法，其特征在于：将固定化全细胞组合物、(R)-6-氰基-5-羟基-3-氧代叔丁酯、辅因子、葡萄糖和缓冲液按一定比例混合后反应得到产物。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述固定化全细胞组合物为酮还原酶全细胞和葡萄糖脱氢酶全细胞按一定比例混合并经固定化处理的组合物。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于：所述酮还原酶全细胞和所述葡萄糖脱氢酶全细胞的组合比例为1：0.1～1：1。
4.如权利要求2或3所述的方法，其特征在于：所述酮还原酶全细胞和所述葡萄糖脱氢酶全细胞由基因工程菌发酵得到，所述基因工程菌选自大肠杆菌或酵母菌，其中优选为大肠杆菌。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述固定化全细胞组合物的浓度为100～400g/L、所述(R)-6-氰基-5-羟基-3-氧代叔丁酯的浓度为100～400g/L、所述辅因子的浓度为0.001～0.01g/L、所述葡萄糖的浓度为100～400g/L和所述缓冲液的浓度为10～100mM/L。
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述反应在pH＝5～8、温度为20～45℃下进行。
7.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述辅因子为NAD、NADH、NADP和NADPH的任意一种或它们的组合，其中优选为NADP。
8.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述缓冲液选自磷酸盐缓冲液或三乙醇胺缓冲液，其中优选为三乙醇胺缓冲液。
9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述固定化全细胞组合物的制备方法为：将酮还原酶全细胞和葡萄糖脱氢酶全细胞按一定比例与固定剂混合、干燥成型，所述固定剂为聚乙二醇、聚丙烯酰胺、聚乙烯醇或海藻酸钙的一种或它们的组合。
10.如权利要求9所述的方法，其特征在于：所述固定化全细胞组合物与所述固定剂的比例为：1：1～1：2。
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