[发明专利]一种具有双重响应性聚合物载药纳米胶束的制备

权利要求书

1.一种具有双重响应性聚合物载药纳米胶束，其特征是聚(N-异丙基丙烯酰胺-co-聚乙二醇)-聚(L-谷氨酸-γ-酰肼)嵌段共聚物通过腙键共价负载阿霉素，然后在水溶液中自组装形成纳米胶束，胶束粒径在250～550nm范围，其中聚(L-谷氨酸-γ-酰肼)与阿霉素复合部分位于胶束的内层，聚(N-异丙基丙烯酰胺-co-聚乙二醇)链段位于胶束的外壳，胶束具有温度和pH双重响应性，低临界溶液温度在人体体温37℃，pH值在4.5～5.8时酰肼基团结构发生变化，腙键断裂。

2.一种具有双重响应性聚合物载药纳米胶束的制备方法，其特征是制备反应经过了四步：

(1)首先在100ml的烧瓶中加入5.0gN-异丙基丙烯酰胺(NIPAm)和0.75g烯丙基聚乙二醇,40ml无水乙醇为溶剂，在0.115g链转移剂巯基乙胺的存在下，以0.165g的偶氮二异丁腈为引发剂，60℃在N₂保护下反应12h后，减压蒸馏除去大部分溶剂,并将其缓慢滴入到过量无水乙醚中得到白色沉淀，过滤后在35℃下真空干燥得粗产物，将粗产物溶于少量二次蒸馏水中，升温后出现沉析，趁热过滤，35℃下真空干燥得白色产物为端氨基聚(N-异丙基丙烯酰胺-co-聚乙二醇)共聚物，简称：PNE-NH₂；

(2)称取L-谷氨酸20.0g和苯甲醇16.5g于250ml单口烧瓶中磁力搅拌混合均匀，慢慢升温至70℃同时逐滴加入60％(w/w)硫酸22.1g，待溶液变澄清，减压蒸馏5h，反应液倒入与硫酸等摩尔的NaHCO₃溶液中至中和溶液呈中性，同时不断搅拌，有大量白色沉淀生成，放入冰箱中过夜，减压抽滤，用无水乙醇和去离子水清洗数遍，除去产物中剩余的苯甲醇和硫酸钠，然后在5％的乙醇溶液中于70℃下重结晶，减压过滤得银白色片状固体L-谷氨酸-苄酯(BLG)，35℃下真空干燥48h，产率为35％；然后称取新制备的L-谷氨酸-苄酯3.05g和30ml无水四氢呋喃(10％，W/V)于100ml三口烧瓶中，水浴下逐渐升温至45℃，使苄酯溶解，称取4.2g三聚光气(较BLG过量5％)倒入反应溶液中，反应5h得淡黄色澄清透明溶液，通N₂半小时，驱赶剩余光气和产生的HCl气体，用碱液吸收尾气。反应液缓慢滴加到大量无水石油醚中，放入冰浴中1h，有白色针状晶体析出，减压抽滤，四氢呋喃/无水石油醚体系纯化两次，35℃真空干燥12h得到活性单体产物，简称为：BLG-NCA，产率为89％；

以共聚物PNE-NH₂为大分子引发剂，引发活性单体BLG-NCA开环聚合反应，在CH₂Cl₂溶剂中，室温25℃和N₂保护磁力搅拌72h后，将反应产物逐滴入过量无水乙醚中得白色沉淀，减压过滤得粗产物，用蒸馏水水多次洗涤粗产物，离心分离得到聚(N-异丙基丙烯酰胺-co-聚乙二醇)-聚(L-谷氨酸-γ-苄酯)嵌段共聚物，在该反应中，PNE-NH₂与BLG-NCA的质量比分别为1：2.0、1：2.5、1：3.0、1：3.5，所得产物分别简称：PNN-1、PNN-2、PNN-3、PNN-4；

(3)在250ml三口烧瓶中加入1.50g由上述(2)中得到的嵌段共聚物PNN-2，然后添加8.0g水合肼(80％)和60ml无水乙醇，在40℃温度下回流反应5小时后得白色浑浊液体，过滤后用无水乙醇洗涤产物数次，35℃真空干燥48h得聚(N-异丙基丙烯酰胺-co-聚乙二醇)-聚(L-谷氨酸-γ-酰肼)的嵌段共聚物，简称：PNN-co-NHNH₂；分别用PNN-1、PNN-3、PNN-4代替PNN-2做共聚物进行类似反应；

(4)精确称取50mg上述酰肼化产物PNN-co-NHNH₂溶于2ml四氢呋喃(THF)中，加入与酰肼基团等摩尔数的盐酸阿霉素，缓慢滴加蒸馏水直到溶液有淡红色且有明显丁达尔效应为止，避光磁力搅拌12h使载药胶束稳定，将载药胶束溶液转移到截留分子量为3500的透析袋内避光透析24h，以除掉未载药的小分子及药物等，透析液转入50ml的容量瓶中定容避光保存。