[发明专利]一种过表达CIAPIN1蛋白的细胞系及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明属于生物技术和细胞遗传学领域，涉及一种过表达CIAPIN1蛋白的细胞系及其制备方法和应用。

背景技术

CIAPIN 1 (cytokine induced apoptosis inhibitor 1) 又称anamorsin，是一个新近发现与凋亡相关的分子。CIAPIN 1在人类基因定位于16号染色体长臂。由8个外显子和7个内含子组成，相对分子质量为39000。在其N端60-99氨基酸位点发现generic methyltransferase profile结构域，C端部分序列与保守的基因COG5636同源，246-277氨基酸有Cx2Cx24Cx2C锌带结构域。CIAPIN 1在小鼠基因定位于8号染色体，成熟mRNA长度为1515bp，CDS长度为929bp。

Shibayama等2004年第一次报道了该分子为细胞因子诱导的抗凋亡分子。研究还表明CIAPIN 1是RAS信号转导通路中的一个新调节分子，Ras信号途径是与许多细胞增殖有关的信号转导通路，该通路独立于凋亡调节分子caspase家族、Bcl-2家族等。Kanakura等发现CIAPIN 1可调节造血功能，CIAPIN 1基因在小鼠胚胎期IL-3诱导红系定向干细胞分化过程中起至关重要的作用，CIAPIN 1基因敲除小鼠由于于贫血而于胚胎期死亡。新近研究在成功制备了CIAPIN 1的单克隆抗体工作基础上，发现CIAPIN 1广泛分布于胎儿和成人的正常组织中，特别是在分化型组织和活性代谢组织中具有高表达。Hao等确定了CIAPIN 1的亚细胞定位为胞质、胞核，浓集于核仁。Li等通过腺病毒载体表达CIAPIN 1蛋白，以及通过SiRNA等技术证明了，CIAPIN 1蛋白的表达变化与肝细胞癌、胃癌密切相关。Hao等研究发现CIAPIN 1蛋白与肾癌、胃癌相关。Wang等人发现，肺癌组织中CIAPIN 1基因表达下调可能与肺癌发生密切相关，CIAPIN 1基因可能通过下调CyclinD 1、上调P27干预了细胞周期，从而抑制肿瘤的生长。上述研究结果揭示，CIAPIN 1对细胞的增殖及分化具有重要的调控作用，在某些癌症发生时表达异常，提示CIAPIN 1基因的表达与肿瘤的发生发展有密切联系。

目前，关于CIAPIN1研究的报道还非常有限，主要集中在肿瘤相关性方面，然而这些结果业已证明CIAPIN 1对细胞的增殖及分化具有重要的调控作用，在细胞凋亡与抗凋亡中发挥重要作用。在前期的研究中，我们也发现狂犬病病毒（Rabies virus，RV）感染N2a细胞时可引起CIAPIN1蛋白上调表达，并且细胞适应性好的RV毒株感染时诱导的CIAPIN1蛋白上调表达量更高。这提示我们，不同细胞适应性的RV毒株，感染细胞时在细胞内增殖和代谢的速度不同，因而引起了不同的应答结果，导致CIAPIN1等蛋白的差异表达，这说明RV感染时CIAPIN1发挥着关键的调节作用。

发明内容

本发明的目的在于提供一种过表达CIAPIN1蛋白的细胞系。

本发明的另一目的在于提供一种过表达CIAPIN1蛋白的细胞系的制备方法。

本发明的再一目的在于提供一种过表达CIAPIN1蛋白的细胞系的应用。

本发明所采取的技术方案是：

一种过表达CIAPIN1蛋白细胞系的制备方法，包括以下步骤：

1）构建重组真核表达质粒：RT-PCR扩增CIAPIN1蛋白的cDNA 序列，并将其插入真核表达质粒pIRESneo中，获得重组真核表达质粒pIRES-CI；

2）转染：将上述重组真核表达质粒转染BHK-21细胞；

3）筛选：将转染后的细胞以含G418 的培养液进筛选培养；

4）获得永生化过表达CIAPIN1蛋白的细胞系：将经筛选培养的细胞经极限稀释法获得阳性单克隆细胞，其中能过表达CIAPIN1蛋白的即为永生化过表达CIAPIN1蛋白的细胞系。

进一步的，步骤1）中编码CIAPIN1蛋白的cDNA 序列如SEQ ID NO：1 所示。

进一步的，上述CIAPIN1蛋白cDNA的RT-PCR扩增引物为：

CIAPIN1-F: GATATCATGGAGGAGTTTGGGATCTCC （SEQ ID NO：2）；

CIAPIN1-R: GAATTCCTAGGCATCCTGGAGATTGCTAT（SEQ ID NO：3）。