[发明专利]检测新霉素的化学发光免疫检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测新霉素的化学发光免疫检测试剂盒，用于检测动物源性食品中如鸡肉组织、内脏中的新霉素含量或残留量。属于免疫学检测领域。

背景技术

新霉素是一种广谱抗生素，常用于动物各种传染病的治疗，对于多种病原菌有较强的抑制作用，对革兰氏阳性和阴性菌皆有效。新霉素存在严重的副作用，具有肾毒性和内耳毒性，它对内耳的伤害，往往是不可逆转的，因此动物食品中的新霉素残留对人类的健康构成巨大威胁。

近年来，水、食品安全、卫生、公共健康和能源等与大众的生活息息相关的问题，也越来越受到全球的关注，见附录1。世界各国针对食品安全问都幵展研究解决办法。欧盟从2006年1月1日起开始执行新的食品安全法规，其中特别要求进口食品必须符合新法规的标准，否则欧盟委员会有权取消其进口资格。随着兽药在畜禽词养过程中的长期大量使用，防止滥用药物具有重要意义。在西方经济发达的国家，人们十分重视兽药残留的监控，颁布了一系列畜产品中兽药残留限量标准和管理法规，严格实施对畜产品中兽药残留的监督、监控与检测，制定了详尽的兽药残留检测方法。

化学发光免疫检测技术是化学发光法和免疫分析法结合的产物，因此同时具有化学发光检测技术的高灵敏性和免疫分析技术的高特异性。本发明通过特有的免疫动物制备具有高亲和力、高特异性的新霉素抗体，并采用酶标记抗体，建立一种可以检测新霉素的化学发光免疫试剂盒，将为鸡肉产品中新霉素药物留检测提供新方法，对保证畜产品安全提供重要的理论和实践依据，维护畜牧业健康发展具有重要意义。

发明内容

针对现有技术中存在的问题，本发明主要是利用抗原与抗体的特异性免疫反应的基本原理来实现的。化学发光免疫分析是化学发光法和免疫分析法结合的产物，因此同时具有化学发光法的高灵敏度和免疫分析法的高特异性。在整个反应过程中，样品中新霉素含量越高，反应体系中发光强度越弱；反之，样品中新霉素含量越少，发光强度越高。

本发明是一种检测新霉素的化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于含有以下成份：

1、包被有新霉素-载体蛋白偶联物的不透明白色酶标板；所述新霉素-载体蛋白偶联物是将新霉素与载体蛋白通过混合酸酐法或碳二亚胺法偶联得到，所述载体蛋白为人血清白蛋白、牛血清白蛋白、鸡蛋白蛋白、鼠血清蛋白或兔血清蛋白；

2、新霉素标准品；

3、新霉素-过氧化物酶标记抗体：该成分为用过氧化物酶标记的新霉素抗体，所述新霉素抗体为单克隆抗体或多克隆抗体；

4、发光底物液：该发光底物液是以鲁米诺货异鲁米诺为发光剂的化学发光底物液，分为A液和B液保存，在使用前按1:1混合使用；其中A液位发光增强剂加鲁米诺货发光增强剂加异鲁米诺，B液为过氧化氢溶液或尿素过氧化氢溶液；

5、2倍浓缩稀释液；

6、20倍浓缩洗涤液。

本发明中，所述的不透明白色酶标板为96孔的可拆卸或不可拆卸的不透明白色酶标板。

本发明中，所述的新霉素标准品，由一系列不同浓度的新霉素标准品组成，浓度为0.02~5.12ng/mL的浓度区间。

本发明中，所述的新霉素-过氧化物酶标记抗体为用过氧化物酶标记的新霉素抗体，如辣根过氧化物酶(HRP)标记的新霉素抗体。

本发明中，所述的发光底物液为商品化的任一种以鲁米诺货异鲁米诺为发光剂的化学发光底物液。

本发明中，所述所述2倍浓缩稀释液，其成分为0.01mol/L，pH7.4的磷酸缓冲液、甘氨酸-HCl缓冲液或Tris-HCl缓冲液，使用前请按1：1稀释（1份浓缩样品稀释液+1份去离子水）。

本发明中，所述20倍浓缩洗涤液，其包含0.05%吐温-20，0.01mol/L的PBST，pH值范围7.0-7.5之间，使用前请按1：19稀释（1份浓缩稀释液+19份去离子水）。

本发明的新霉素的化学发光免疫检测试剂盒应用于新霉素的检测时，检测步骤为：

(1)预处理待测样品，即将待测试的样品处理为液体样品，或者用有机溶剂提取待测样品，氮气吹干并将其复溶于样品稀释液工作液中；

(2)将所需试剂从冷藏环境中取出，置于室温（20～25℃）平衡30min以上，注意每种液体试剂使用前均须摇匀；

(3)取包被新霉素抗原的酶标板，加标准品/待测样品50μL/孔到对应的微孔中,标准品和样品每个浓度做两个平行实验；

(4)加入新霉素抗体工作液，50μL/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置25℃避光环境中反应45min；