[发明专利]一种钻天柳茎段组培快繁的方法

说明书

技术领域

本发明属于植物组培领域，具体涉及一种钻天柳茎段组培快繁的方法。

背景技术

钻天柳(Chosenia arbutifolia)又名朝鲜柳、红梢柳，是杨柳科钻天柳属落叶大乔木，单属单种。该种现已濒临灭绝，属易危(V)级别的濒危树种，是国家Ⅱ级重点保护野生植物。钻天柳主要分布于亚洲东北部,北起自北极圈,向南经东西伯利亚,进人我国境内。东西分布于俄罗斯东部及其岛屿、中国东北部、日本北部至中部和朝鲜的北部。由于生态环境恶化，有的地区已经绝迹，有些地区仅有大树而无幼苗与幼树，其分布区正日益缩减。我国主要产自内蒙古(大兴安岭西坡)、东北三省，生于海拔300m～900m的林区河流两岸排水良好的碎石沙土上。

钻天柳高可达20～30m，胸径达0.5～1m，树冠圆柱形，树皮褐灰色，小枝无毛，黄色带红色或紫红色，有白粉，叶长圆状披针形至披针形，长5～8cm，宽1.5～2.3cm，先端渐尖，基部楔形，两面无毛，上面灰绿色，下面苍白色，常有白粉，边缘稍有锯齿或近全缘，花期5月，果期6月。钻天柳树干通直，树姿高大挺拔，枝条秋季落叶后色彩鲜红，是三北地区少有的冬季观枝大乔木，秋季树干高可达30m以上。木材纹理通直，颜色均一，可做建筑用材、家俱、造纸等用。钻天柳喜阳光，耐寒性强，极耐水淹。钻天柳根系发达，是地上部的3～5倍，是很好的防风固沙和防洪树种。由于生态环境恶化，有的地区已经绝迹，有些地区仅有大树而无幼苗与幼树，其分布区正日益缩减。

钻天柳人工繁殖十分困难，从60年代初开始，不断有人进行繁殖试验，比如扦插育苗、药物刺激生根处理、组培育苗等，但一直未能扩大繁育和推广，繁育难得问题一直未能得到彻底解决。目前采用种子繁殖，扦插枝条不易成活。

目前公开的钻天柳的组织培养中，主要采用了MS、WPM进行了研究，2006年和2010年采用了MS为基本培养基，进行了诱导的基本培养基、增殖和愈伤的培养基采用MS，生根及生根继代培养采用l/2MS，建立起钻天柳(Chosenia arbutifolia)离体繁殖技术。2013年发表的陶双勇和张小单的文章采用WPM作为基本培养基进行了研究，诱导生根率较低。以上几种配方的生长状况一般，可操作性和重复性不高。

发明内容

针对现有钻天柳组织培养方法中存在的生长状况一般、可操作性和重复性不高问题，本发明旨在提供一种钻天柳茎段组培快繁的方法。

本发明提供一种钻天柳茎段组培快繁的方法，包括如下步骤：

采集钻天柳当年生茎段，依次进行1)外植体消毒、2)丛生芽诱导培养、3)丛生芽增殖培养、4)丛生芽生根培养、5)炼苗移栽，得到钻天柳组培苗。

所述采集钻天柳当年生茎段，为在春天采集钻天柳当年生枝条，要求枝条直径3mm以上，将所采枝条截成3cm的茎段，要求每个茎段都长有一个腋芽。

所述1)外植体消毒，为将外植体以升汞溶液消毒，优选为以质量百分含量0.3％的升汞溶液消毒7min。

所述2)丛生芽诱导培养，为将消毒后的茎段接种到丛生芽诱导培养基上，使茎段先萌发新的丛生芽，后展开叶片。

所述丛生芽诱导培养基是以DKW培养基为基本培养基，含有1.0mg/L(终浓度，下同)的6-BA(6-苄基氨基嘌呤，benzylaminmopurine)、0.1mg/L的NAA(萘乙酸，1-Naphthaleneacetic acid)的培养基，即DKW+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L培养基。

所述萌发新的丛生芽，时间为接种到丛生芽诱导培养基上20天后。

所述展开叶片，时间为接种到丛生芽诱导培养基上45天后。

所述3)丛生芽增殖培养，为将丛生芽诱导培养所得丛生芽接种到脱分化培养基上，培养至产生愈伤组织，将愈伤组织接种到分化培养基上，培养至产生不定芽。

所述脱分化培养基是以DKW培养基为基本培养基，含有2.0mg/L的6-BA、0.1mg/L的NAA、4.5g/L琼脂、20g/L葡萄糖的培养基，即DKW+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.1mg/L+琼脂4.5g/L+葡萄糖20g/L的培养基。

所述产生愈伤组织，时间为接种到脱分化培养基上40天后。

所述分化培养基是以1/2NRM培养基为基本培养基，含有0.75mg/L的6-BA、0.1mg/L的NAA、4.5g/L琼脂、20g/L葡萄糖的培养基，即1/2NRM+6-BA 0.75mg/L+NAA 0.1mg/L+琼脂4.5g/L+葡萄糖20g/L的培养基。