[发明专利]一种歪头菜植株再生的快速繁殖方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物组织培养的快繁方法，属于植物技术领域。

背景技术

歪头菜，Vicia unijuga，豆科，别名三铃子，多年生草本，茎直立，偶数羽状复叶，具有小叶2枚，总状花序预生或腋生，蝶形花，蓝紫色或紫红色，花期6-7月份，荚果扁平，果期8-9月份。分布于我国东北、华北、西北、华东、华中、西南，生于草地、山沟、岸边、林缘或向阳的灌丛中，喜光，稍耐阴、耐瘠薄，喜冷凉气候。可以做饲料、药用及观赏，全草入药，能解热，利尿，理气，止痛，主治头晕，浮肿，胃痛；外用治疗等，采用种子进行繁殖。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供歪头菜植株再生的快速繁殖方法，本研究利用培养出来的无菌苗作为外植体材料，诱导出愈伤组织并实现了植株再生，为实现歪头菜的转基因育种提供了技术平台。

本发明所要解决的技术问题是通过以下方案来实现的：

取歪头菜种子在清水中浸泡8h后，在75%酒精中浸泡1min，无菌水冲洗3次，0.1%的升汞溶液浸泡10min，无菌水冲洗5次，播种于装有MS培养基的150ml三角瓶，每瓶播种20粒，25℃暗培养萌发，14h/d光照培养，培养出来的无菌苗的子叶切割，接入培养基为SN6+IBA1.0mg/L+6-BA0.5mg/L进行愈伤组织诱导，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，光照强度1200lx，光照时间12h/d，温度25±2℃，诱导出来的愈伤组织放入分化培养基SN6+KT0.2-0.3mg/L+2,4-D0.1-0.2mg/L+CM10%，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，光照2300lx，光照时间12h/d，温度25±2℃，分化培养出来的歪头菜芽苗放入培养基MS+CCC1.5-2.0mg/L培养基中进行壮苗培养，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，光照2300lx，光照时间12h/d，温度25±2℃，揭开瓶盖，注入薄层无菌水，隔两天补一次水，一周后将成功炼苗的试管苗取出，洗净根上残余培养基，移栽至育苗盘，向育苗盘中喷施多菌灵消毒，每天早晚喷施水雾，栽培温度为25±2℃，利用自然散射光。

采用本发明制备的歪头菜成活率高，培养周期短，利于大规模种植。

下面将结合具体实施方式对本发明作进一步阐述，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。

具体实施方式

实施例1

取歪头菜种子在清水中浸泡8h后，在75%酒精中浸泡1min，无菌水冲洗3次，0.1%的升汞溶液浸泡10min，无菌水冲洗5次，播种于装有MS培养基的150ml三角瓶，每瓶播种20粒，25℃暗培养萌发，14h/d光照培养，培养出来的无菌苗的子叶切割，接入培养基为SN6+IBA1.0mg/L+6-BA0.5mg/L进行愈伤组织诱导，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，光照强度1200lx，光照时间12h/d，温度25±2℃，诱导出来的愈伤组织放入分化培养基SN6+KT0.2mg/L+2,4-D0.1mg/L+CM10%，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，光照2300lx，光照时间12h/d，温度25±2℃，分化培养出来的歪头菜芽苗放入培养基MS+CCC1.5mg/L培养基中进行壮苗培养，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，光照2300lx，光照时间12h/d，温度25±2℃，揭开瓶盖，注入薄层无菌水，隔两天补一次水，一周后将成功炼苗的试管苗取出，洗净根上残余培养基，移栽至育苗盘，向育苗盘中喷施多菌灵消毒，每天早晚喷施水雾，栽培温度为25±2℃，利用自然散射光，成活率90%。

实施例2