[发明专利]一种晚樱叶挥发油的制备方法及其抗肿瘤应用

说明书

技术领域

本发明属于医药领域，具体涉及一种晚樱叶挥发油的制备方法及其抗肿瘤应用。

背景技术

樱花为蔷薇科植物，不仅具有很高的观赏价值，而且具有多种药用价值，叶及花作为传统的中药材，具有平喘、润肠的功效。日本晚樱是樱花中的优点品种，其花大、重瓣、颜色鲜艳、气味芳香、花期长，在我国广泛栽培。

植物挥发油是中药重要有效成分，具有抗氧化、祛痰、止咳、抗菌、消炎等功能。经研究表明，日本晚樱叶挥发油以含氧化合物为主，以醛、酯和醇类含量最高，主要包含苯甲醛、香豆素、植物醇等。天然苯甲醛广泛存在于蔷薇科植物中，可用作食用香料，具有抑制癌细胞生成、阻止癌细胞蛋白质合成的作用，而对于正常细胞无伤害，对霉菌和细菌均具有一定的抑制作用。香豆素不仅是一种重要的香料，还具有抗肿瘤、抗凝血、抗氧化等多种药用功能。因此，日本晚樱叶挥发油具有广泛的应用价值，可应用于医药、食品、保健品、香料等行业。

肿瘤是目前危害人类健康的主要疾病之一，医学界在不断的研究和开发新的抗癌药物，从天然植物中寻找具有抗癌活性的化合物是研究开发抗癌药的重要途径。植物挥发油因其特殊的香味和作用可作为抗癌药物来研究。

通过文献检索，在有关晚樱叶挥发油的研究报道中，未见到抗癌活性的研究。

发明内容

为满足临床需要，扩大用药品种，更好地治疗肿瘤疾病，本发明提供一种晚樱叶挥发油的制备方法及其抗肿瘤应用。

为了实现上述目的，本发明的技术方案如下：

晚樱叶阴干，粉碎；取晚樱叶粉末置于连续逆流超声提取器中，加入原料4~6倍的60~70%的乙醇溶液，控温50~60℃，重复提取1~2次，每次90~120min；提取液浓缩，用有机溶剂萃取2~3次，后经无水硫酸钠干燥、减压浓缩等步骤得到晚樱叶挥发油。

所述的有机溶剂为石油醚或乙醚中的任意一种。

晚樱叶挥发油在制备抗肿瘤药物中的应用。

通过体外肿瘤细胞体外抑制试验，观察晚樱叶挥发油的抗肿瘤作用，结果表明晚樱叶挥发油对腹水型S180、肝癌及黑色素瘤B16均有一定的抑制作用，具有显著抗癌活性，且其毒副作用小。

本发明的有益效果通过以下实验得到了验证：

实验方法：

1、受试提取物：晚樱叶挥发油

2、细胞株：腹水瘤细胞株S180、肝癌细胞株BEL-7404及黑色素瘤细胞株B16。 

3、给药剂量和方法

晚樱叶挥发油组：10mg/kg/天，灌胃给药，隔一天一次，共五天。

阴性对照组：10mg/kg/天，生理盐水肌注给药，隔一天一次，共五天。

阳性对照组：30mg/kg/天，5-氟尿嘧啶肌注给药，隔一天一次，共五天。

灌胃后2h，用HPLC检测血浆药物浓度。

4、种植瘤模型的建立与给药

（1）皮下种植：分别将上述细胞培养至90%融合，收集细胞，取2×10 ⁶细胞悬液，注射至小鼠肋下皮下组织，于术后15天取材，称量瘤重。另取同样模型，观察30天，计算药物对模型动物存活率的影响。

（2）脾内种植瘤肝转移模型：取2×10 ⁶细胞悬液注射至小鼠脾包膜内，于术后15天取脾和肝脏，测量瘤重和肝转移数。

（3）给药方式：种植瘤细胞同时给药。

5、结果

结果如表1、表2和表3显示，晚樱叶挥发油用药均有不同程度的抑制肿瘤生长和转移的作用，可延长实验小鼠的生存期。

表1 晚樱叶挥发油对种植瘤的抑制作用（n=20，                                                ±S）

表2 晚樱叶挥发油对肿瘤肝转移发生率的影响（n=20，%）

表3  晚樱叶挥发油对实验小鼠生存率的影响（n=20，%）

由表1、表2和表3可以看出，晚樱叶挥发油组用药抑制肿瘤生长、转移的效果与阳性对照组基本相当，可有效延缓实验小鼠的生存寿命，其效果明显优于对照组。