[发明专利]一种用于同时检测嗜吞噬细胞无形体和查菲埃里克体的双重荧光PCR的检测试剂盒及引物和探针

权利要求书

1.用于同时检测嗜吞噬细胞无形体和查菲埃里克体的引物和探针，其特征在于，所述引物和探针如序列表SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：6所示，其中序列SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2分别为检测嗜吞噬细胞无形体的正义引物和反义引物，序列SEQ ID NO：3为检测嗜吞噬细胞无形体的荧光探针，序列SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：5分别为检测查菲埃里克体的正义引物和反义引物，序列SEQ ID NO：6为检测查菲埃里克体的荧光探针。

2.根据权利要求1所述的引物和探针，其特征在于：所述探针SEQ ID NO：3的5’端标记报告荧光基团JOE，3’端标记淬灭荧光基团TAMRA。

3.根据权利要求1所述的引物和探针，其特征在于：所述探针SEQ ID NO：6的5’端标记报告荧光基团FAM，3’端标记淬灭荧光基团TAMRA。

4.一种嗜吞噬细胞无形体和查菲埃里克体的检测试剂盒，其特征在于，由以下组分组成：

1)DNA提取试剂；

2)DNA标准品：为嗜吞噬细胞无形体的DNA片段，如序列表SEQ ID No：9；和查菲埃里克体的DNA片段，如序列表SEQ ID No：12；

3)实时定量PCR反应液，其包括：PCR反应混合液，荧光定量PCR参比染料，检测嗜吞噬细胞无形体的正义引物、反义引物和荧光探针，检测查菲埃里克体的正义引物、反义引物和荧光探针；

4)阴性对照；

5)DEPC水；

其中，检测嗜吞噬细胞无形体的正义引物为序列表SEQ ID No：1所示的核苷酸序列，反义引物为序列表SEQ ID No：2所示的核苷酸序列，荧光探针为序列表SEQ ID No：3所示的核苷酸序列，其5’端标记报告荧光基团JOE，3’端标记淬灭荧光基团TAMRA；检测查菲埃里克体的正义引物为序列表SEQ ID No：4所示的核苷酸序列，反义引物为序列表SEQ ID No：5所示的核苷酸序列，荧光探针为序列表SEQ ID No：6所示的核苷酸序列，其5’端标记报告荧光基团FAM，3’端标记淬灭荧光基团TAMRA。

5.根据权利要求4所述的检测试剂盒，其特征在于，所述DNA提取试剂为DNA提取试剂盒。

6.根据权利要求4所述的检测试剂盒，其特征在于，所述实时定量PCR反应液包括：2×PCR反应混合液，检测嗜吞噬细胞无形体的正义引物0.2μM、反义引物0.2μM和荧光探针0.4μM，检测查菲埃里克体的正义引物0.2μM、反义引物0.2μM和荧光探针0.4μM；1×荧光定量PCR参比染料。

7.根据权利要求6所述的检测试剂盒，其特征在于，所述PCR反应混合液为Premix Ex Taq^TM混合液，所述荧光定量PCR参比染料为ROX Reference Dye。