[发明专利]一种响铃豆植株再生的快速繁殖方法

说明书

技术领域

本发明涉及响铃豆组织培养的快繁方法，属于植物技术领域。

背景技术

响铃豆，Crotalaria albida Heyne ex Roth，豆科，别名黄花地丁、小响铃、马口铃，灌木状草本，高30-150厘米，有白色柔毛，叶倒卵状披针形或倒披针形，先端钝圆，有小凸尖，基部楔形，上面光滑，下面生疏柔毛，长15-40毫米，宽3-17毫米，托叶细小，总状花序顶生或腋生，小苞片着生花萼基部，萼长约7毫米，深裂，上面2萼齿椭圆形，下面3萼齿披针形，均有短柔毛，花冠黄色，稍长于萼，荚果圆柱形，膨胀，长8-12毫米，光滑，有种子6-12粒。响铃豆产安徽、江西、福建、湖南、贵州、广东、海南、广西、四川、云南，生于荒地路旁及山坡疏林下，海拔200-2800米。响铃豆性味归经：苦、辛，凉，功能主治：清热解毒，止咳平喘，截疟，用于尿道炎，膀胱炎，肝炎，胃肠炎，痢疾，支气管炎，肺炎，哮喘，疟疾；外用治痈肿疮毒，乳腺炎。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是响铃豆植株再生的快速繁殖方法，本发明通过建立响铃豆的高效组培再生体系，达到迅速繁殖推广响铃豆优良种苗的同时，也为响铃豆优良基因资源的保存与开发利用提供理论依据，对响铃豆优良基因资源的可持续发展，分子育种及新药开发等方面研究都会发挥重要作用。

为解决上述技术问题，本发明采用下列技术方案：

取响铃豆幼嫩叶片，流水冲洗20min，超净工作台上10%次氯酸钠处理9min，用无菌的抗氧化剂预处理液对外植体进行30min预处理，流水冲洗5遍，预处理液为100mg/L柠檬酸+100mg/L抗坏血酸，消毒处理过的响铃豆叶片接入培养基为WPM+CPPU2.0mg/L+2,4-D0.5mg/L+0.04%DTT中进行愈伤组织诱导，附加蔗糖40g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，暗光照，温度25℃，诱导出来的愈伤组织接入培养基为WPM+ZT2.0mg/L+TDZ1mg/L中进行愈伤组织分化，附加蔗糖45g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，光照2000lx，光期10h/d，温度25℃，分化出的芽苗接种到1/2WPM+1.5-2mg/LIBA+800-1000mg/L硫代硫酸钠中进行生根诱导，附加蔗糖45g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，光照12000lx，光期10h/d，温度25℃。

采用本发明制备的响铃豆生根率高，利用率大，利于大规模种植。

下面将结合具体实施方式对本发明作进一步阐述，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。

具体实施方式

实施例1

取响铃豆幼嫩叶片，流水冲洗20min，超净工作台上10%次氯酸钠处理9min，用无菌的抗氧化剂预处理液对外植体进行30min预处理，流水冲洗5遍，预处理液为100mg/L柠檬酸+100mg/L抗坏血酸，消毒处理过的响铃豆叶片接入培养基为WPM+CPPU2.0mg/L+2,4-D0.5mg/L+0.04%DTT中进行愈伤组织诱导，附加蔗糖40g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，暗光照，温度25℃，诱导出来的愈伤组织接入培养基为WPM+ZT2.0mg/L+TDZ1mg/L中进行愈伤组织分化，附加蔗糖45g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，光照2000lx，光期10h/d，温度25℃，分化出的芽苗接种到1/2WPM+1.5mg/LIBA+800mg/L硫代硫酸钠中进行生根诱导，附加蔗糖45g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，光照12000lx，光期10h/d，温度25℃，生根率92%。

实施例2

取响铃豆幼嫩叶片，流水冲洗20min，超净工作台上10%次氯酸钠处理9min，用无菌的抗氧化剂预处理液对外植体进行30min预处理，流水冲洗5遍，预处理液为100mg/L柠檬酸+100mg/L抗坏血酸，消毒处理过的响铃豆叶片接入培养基为WPM+CPPU2.0mg/L+2,4-D0.5mg/L+0.04%DTT中进行愈伤组织诱导，附加蔗糖40g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，暗光照，温度25℃，诱导出来的愈伤组织接入培养基为WPM+ZT2.0mg/L+TDZ1mg/L中进行愈伤组织分化，附加蔗糖45g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，光照2000lx，光期10h/d，温度25℃，分化出的芽苗接种到1/2WPM+2mg/LIBA+1000mg/L硫代硫酸钠中进行生根诱导，附加蔗糖45g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，光照12000lx，光期10h/d，温度25℃，生根率94%。

实施例3

取响铃豆幼嫩叶片，流水冲洗20min，超净工作台上10%次氯酸钠处理9min，用无菌的抗氧化剂预处理液对外植体进行30min预处理，流水冲洗5遍，预处理液为100mg/L柠檬酸+100mg/L抗坏血酸，消毒处理过的响铃豆叶片接入培养基为WPM+CPPU2.0mg/L+2,4-D0.5mg/L+0.04%DTT中进行愈伤组织诱导，附加蔗糖40g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，暗光照，温度25℃，诱导出来的愈伤组织接入培养基为WPM+ZT2.0mg/L+TDZ1mg/L中进行愈伤组织分化，附加蔗糖45g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，光照2000lx，光期10h/d，温度25℃，分化出的芽苗接种到1/2WPM+2mg/LIBA+800mg/L硫代硫酸钠中进行生根诱导，附加蔗糖45g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，光照12000lx，光期10h/d，温度25℃，生根率95%。