[发明专利]一种Sabin株脊髓灰质炎Ⅰ型病毒单克隆抗体及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及免疫学领域与疫苗学领域，具体地，涉及一种抗Sabin株脊髓灰质炎Ⅰ型病毒单克隆抗体及产生该抗体的杂交瘤细胞株以及抗体的应用。

背景技术

脊髓灰质炎疾病早在公元前1580-1350时期就存在于人类社会中，最早的证据来源于古埃及石壁画中一个呈站立姿态的人物，具有明显的脊髓灰质炎疾病症状：腿部弯曲萎缩，脚面畸形。然而，直到1789年，英国人Michael Underwood才首次描述了脊髓灰质炎疾病的临床症状，称之为“下肢衰弱”。半个世纪后，德国人的研究表明脊髓灰质炎疾病可能具备传染性。1894年在美国爆发了有记载以来最大规模的婴儿瘫痪灾难，后来被证实罹患的是脊髓灰质炎疾病。1908年澳大利亚医生Karl Landsteiner和Erwin Popper首次提出了假说，认为脊髓灰质炎疾病是由一种病毒引起的。随后在美国流行的疫情更加速了人们对疾病传播的研究。直到1931年Macfarlane Burnet和Jean MacNamara首次解释了三种脊髓灰质炎病毒(后称脊灰病毒)，即Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ型。上述三种病毒导致脊髓灰质炎(poliomyelitis)疾病，该疾病是一种传播广泛、侵犯中枢神经系统的传染病。感染脊灰病毒的患者中有90％没有临床症状或只有很轻的临床症状。这些症状包括发烧、头疼、呕吐、疲劳、脖颈僵直、四肢疼痛等。在每200名受感染的患者中会有一位产生不可逆的瘫痪，部位主要集中在腿部。更为严重的瘫痪症状可以延伸到患者的躯干，包括胸部和腹部肌肉的麻痹，最为严重的症状是当脊灰病毒侵染脑部细胞后造成中枢呼吸系统的破坏，导致吞咽和说话的困难。有5-10％的患者因为呼吸肌麻痹导致死亡。脊髓灰质炎疫苗(包含Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型的脊髓灰质炎病毒)是预防脊髓灰质炎疾病的有效手段。

自1988年实施消灭脊髓灰质炎(脊灰)战略以来，我国通过接种口服脊髓灰质炎减毒活疫苗(OPV)消灭了本土野毒株引起的脊髓灰质炎。但是仍存在OPV引起的疫苗相关麻痹病例(VAPP)和疫苗衍生株(VDPV)，脊髓灰质炎灭活疫苗(IPV)基本可避免OPV上述缺点。WHO指出当全球证实消除脊灰后，将停止使用OPV，届时可能需要脊髓灰质炎灭活疫苗(IPV)来长期保持脊灰免疫水平。相对于野毒株IPV，Sabin株IPV在制造和使用过程中更安全，对它的研究受到了WHO的高度重视。目前生产脊髓灰质炎减毒株灭活疫苗的国家有中国、日本及荷兰。

如上所述，根据抗原决定簇不同脊髓灰质炎病毒可分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型三个血清型，任何一型病毒造成的疾病都称为脊髓灰质炎。Ⅰ型易引起瘫痪，也最容易引起流行。三个型别的病毒间中和试验无交叉反应。每种脊髓灰质炎病毒均有两种抗原，D(致密)抗原和C(无核心)抗原。前者存在于成熟的、有感染性的病毒颗粒中，是脊髓灰质炎病毒的中和抗原，具有型特异性。C抗原存在于经过56℃灭活，或者未成熟的空心病毒颗粒中，是一种耐热的抗原成份，与三个型别的脊髓灰质炎病毒的抗血清均呈补体结合阳性反应。D抗原含量反应完整的病毒抗原颗粒的多少，是体外测定IPV效力的关键指标，与疫苗在人体内的免疫效力有较好的一致性。脊髓灰质炎病毒抗体是指动物或人体抗脊髓灰质炎各型别病毒产生的IgG、IgM等类型抗体的总称，广泛应用于脊髓灰质炎病毒鉴定、脊髓灰质炎疫苗以及各型别抗原的定性和定量检测中。

由于目前脊髓灰质炎Ⅰ型病毒抗原检测普遍采用的多抗包被——多抗夹心的检测体系，该体系对于Ⅱ、Ⅲ型存在较大的交叉反应，尤其在用于三型混合疫苗Sabin IPVⅠ型抗原检测时，由于交叉反应导致检测结果不能真实反应Ⅰ型抗原的含量以及疫苗Ⅰ型的免疫原性，同时WHO也推荐采用多抗与单抗匹配的方式检测三价脊灰疫苗中的各型抗原含量；目前国际上尚缺乏Sabin IPV D抗原检测的标准化的试剂，制备特异性好，具有中和活性的单克隆抗体，可为Sabin IPV体外效力检测方法的标准化奠定基础。因此，有必要制备一种型特异的脊髓灰质炎Ⅰ型单克隆抗体，用于Ⅰ型脊灰抗原、抗体的检测与病毒的鉴别。

发明内容

本发明的目的在于提供一种Sabin株脊髓灰质炎Ⅰ型病毒的单克隆抗体，用于Ⅰ型脊灰病毒抗原含量的检测。

本发明的另一目的在于提供上述单克隆抗体的应用。