[发明专利]一种灵芝菌固体发酵提取物的制备方法

权利要求书

1.一种灵芝菌固体发酵提取物的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

步骤（1），灵芝菌种制备：将灵芝斜面菌种于一级菌种培养液中进行活化，生长4-5天，得到一级菌种；分离后将一级菌种转入二级菌种培养液中进行培养，4-5天后得二级菌种；

步骤（2），固体培养基配制：按质量比1.8-2.2:0.9-1.1:0.9-1.1:6称取三七残渣、甘蔗渣、米糠和纯化水，充分拌匀后，将其装入培养袋中，每袋重量为1.4-1.7kg，灭菌后备用，得到固体培养基；

步骤（3），接种发酵：将步骤（1）得到的二级菌种转接至步骤（2）得到的固体培养基内，接种量为10-30%，接种完毕扎袋时两边与外界相通以供氧；接种后将固体培养基置于温度25-30℃，湿度60-75%的培养环境下进行暗培养；

步骤（4），培养终点确定：待固体培养基长满灵芝菌丝体而未长子实体前即可结束培养；

步骤（5），共发酵提取物的制备：对长满菌丝体的固体培养基进行提取，提取液经浓缩、干燥，得共发酵产物，即灵芝菌固体发酵提取物，该灵芝菌固体发酵提取物中灵芝多糖含量≥50%，灰分含量≤10%。

2.根据权利要求1所述的灵芝菌固体发酵提取物的制备方法，其特征在于步骤（1）中所述的斜面菌种为灵芝菌种接种于PDA培养基得到的。

3.根据权利要求1所述的灵芝菌固体发酵提取物的制备方法，其特征在于步骤（1）中所述的一级、二级菌种培养液均为包括按照重量份数计的如下组分：马铃薯200份，葡萄糖20份，蛋白胨2份，KH₂PO₄1份，MgSO₄0.6份，水1000份；pH自然。

4.根据权利要求1所述的灵芝菌固体发酵提取物的制备方法，其特征在于步骤（2）中所述的固体培养基中三七残渣、甘蔗渣和米糠的质量比为2：1：1。

5.根据权利要求4所述的灵芝菌固体发酵提取物的制备方法，其特征在于所述的三七残渣为提取三七总皂苷后的三七残渣，所述的甘蔗渣为榨糖后的甘蔗渣。

6.根据权利要求1所述的灵芝菌固体发酵提取物的制备方法，其特征在于步骤（2）中所述的培养袋为低压聚乙烯袋。

7.根据权利要求1所述的灵芝菌固体发酵提取物的制备方法，其特征在于步骤（3）中所述的扎袋的具体操作为将固体培养基的两端用PTFE无菌封口透气膜封口。

8.根据权利要求1所述的灵芝菌固体发酵提取物的制备方法，其特征在于步骤（3）中所述的接种的具体操作是：灭菌备用的固体培养基和二级菌种液在无菌操作室内进行接种，用长柄镊子在固体培养基顶端均匀垂直打三个孔，每个孔接种15-20ml的菌种液，再用培养基盖住接种孔。

9.根据权利要求1所述的灵芝菌固体发酵提取物的制备方法，其特征在于步骤（4）中所述的培养时间为15-25天。

10.根据权利要求1所述的灵芝菌固体发酵提取物的制备方法，其特征在于步骤（5）中所述的提取方法为将长满菌丝体的培养基用质量倍数1.5-2.5倍量，浓度为85%乙醇回流提取2-3次，过滤，合并滤液得灵芝共发酵物乙醇提取液，浓缩至粘稠后，于70℃的鼓风干燥箱中干燥，得到干燥物A；滤渣用质量倍数1.5-2.5倍量的纯化水热回流提取2-3次，过滤，合并滤液得灵芝共发酵物水提取液，浓缩，喷雾干燥，得到干燥物B；将干燥物A和干燥物B合并，即得灵芝菌固体发酵提取物。