[发明专利]一种自身免疫性抗原阳性血清的纯化制备方法

说明书

技术领域

本发明属于体外诊断技术领域，具体涉及一种自身免疫性抗原阳性血清的纯化制备方法。

背景技术

正常情况下，机体将自身组织成分识别为“自我”，一般不对其产生免疫应答，此为自身耐受。自身耐受的产生是由于在胚胎期发育的淋巴细胞克隆，凡能识别自身组织的均被破坏或禁忌，即Bumet的禁忌克隆学说。但在某些情况下，自身耐受遭到破坏，禁忌细胞株活跃，机体免疫系统针对某些自身组织成分产生了免疫应答，就可能导致自身免疫病的发生。发生自身免疫病的关键是机体产生了针对自身组织成分的自身抗体或致敏的T淋巴细胞，并在体内发生了自身免疫应答，导致自身组织细胞的损伤。机体为什么会产生自身抗体及致敏T细胞，其原因是非常复杂的，据研究与以下因素有关。

一、自身抗原的出现

(一)隐蔽抗原的释放

隐蔽抗原(sequestered antigen)是指体内某些组织成分如精子、眼内溶物、脑等，在正常情况下从未与免疫细胞接触过，其相对应的淋巴细胞克隆仍存在，并具免疫活性。一旦因手术、外伤、感染等原因破坏隔绝屏障，隐蔽抗原释放入血流或淋巴液，便与免疫系统接触。免疫系统将其误认为是“异物”，引发自身免疫应答，导致自身免疫病的发生。

(二)自身成分的改变

自身成分在受到物理因素(如冷、热、电离辐射)、化学因素(如药物)或生物因素(如细菌、病毒等)作用后，均可使其抗原性发生变化。改变了的自身成分可刺激免疫系统引起自身免疫应答，导致自身免疫性疾病。

(三)共同抗原引发的交叉反应

某些细菌、病毒与正常人体某些组织细胞上有相类似的抗原决定簇，针对这些细菌、病毒抗原决定簇产生的自身抗体和致敏淋巴细胞可与自身组织细胞发生交叉反应，引起自身免疫性疾病。

二、免疫调节异常

(一)淋巴细胞旁路活化

正常情况下，体内存在针对自身抗原的T/B淋巴细胞克隆。一般Th淋巴细胞对自身成分是处于耐受状态，B淋巴细胞仍能对自身成分发生应答。由于无Th细胞辅助，故正常情况下不出现自身免疫应答。某些外来抗原具有与自身成分相似或相同的B细胞识别的决定簇，但由于T细胞识别的载体决定簇不同，识别自身成分载体决定簇的Th细胞处于耐受状态，而识别外来抗原载体决定簇的Th细胞能被激活发生反应，故外来抗原可辅助B细胞产生免疫应答，即称为Th细胞旁路活化，从而引发自身免疫应答。

(二)多克隆刺激剂的旁路活化

某些多克隆刺激剂如EB病毒和超抗原，可激活处于耐受状态的Th细胞或者直接向B细胞发出辅助信号刺激其产生自身抗体，引发自身免疫应答。

(三)辅助刺激因子表达异常

在免疫应答过程中，免疫活性细胞的激活，除了免疫活性细胞对抗原递呈细胞表面的抗原肽复合物识别外，还必须有两细胞间辅助刺激因子的相互作用。如抗原递呈细胞表面辅助刺激因子的异常表达，便可激活自身免疫应答的T细胞，引发自身免疫性疾病。

此外，Thl和Th2细胞的功能失衡和自身免疫性疾病的发生也有一定关系。

三、Fas/FasL表达异常

Fas/FasL表达异常和自身免疫病的发生有关，Fas属TNFR/NGFR家族成员(又称CD95)，普遍表达于多种细胞包括淋巴细胞表面。其配体即FasL(Fas ligand)通常出现于活化的T细胞如CTL和NK细胞膜上，又可以分泌脱落至细胞外。无论是膜结合型或是游离型的FasL，与细胞膜上的Fas结合后均可诱导细胞凋亡。在Fas/FasL基因缺陷的患者体内，因为激活诱导自身免疫应答的淋巴细胞凋亡机制受损，T、B淋巴细胞克隆性增殖失控，故易发生多种自身免疫性疾病。

四、遗传因素

人类的自身免疫性疾病常有家族遗传倾向。研究中发现多种自身免疫性疾病的发生率与HLA的某些基因型检出率呈正相关。大多数HLA系统与自身免疫性疾病的相关性表现在HLA-B或DR抗原上。

如公布号为CN103018436A，公布日为2013-4-3的一种用家兔制备鸡传染性支气管炎阳性血清的方法，其在经过免疫取血后，仅将血液分离出血清，对血清进行离心过滤就得到阳性血清。但是，该阳性血清存在使用效果不好的问题。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种使用效果优良的自身免疫性抗原(自免原)阳性血清的纯化制备方法。

为解决以上技术问题，本发明采取如下技术方案：