[发明专利]一种过敏原阳性血清的纯化制备方法在审
| 申请号： | 201410553626.5 | 申请日： | 2014-10-17 |
| 公开（公告）号： | CN104977401A | 公开（公告）日： | 2015-10-14 |
| 发明（设计）人： | 王洪;李庆春;孙婵;夏波;秦枫;钱林;王秀伟 | 申请（专利权）人： | 苏州浩欧博生物医药有限公司 |
| 主分类号： | G01N33/531 | 分类号： | G01N33/531 |
| 代理公司： | 苏州创元专利商标事务所有限公司 32103 | 代理人： | 孙仿卫;汪青 |
| 地址： | 215123 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 过敏原 阳性 血清 纯化 制备 方法 | ||
1. 一种过敏原阳性血清的纯化制备方法，包括用过敏原对健康动物进行免疫、采血后获得抗血清的步骤和对所述的抗血清进行纯化获得阳性血清的步骤，其特征在于：所述的纯化的具体方法为：
对所述的抗血清进行亲和纯化得到IgG抗体；将所述的IgG抗体和人IgE Fc按质量比为1:1～2偶联后，经分离纯化获得IgG-IgE Fc连接物浓溶液，将所述的IgG-IgE Fc连接物浓溶液稀释至浓度为0.5～1μg/ml，即得所述的阳性血清。
2. 根据权利要求1所述的过敏原阳性血清的纯化制备方法，其特征在于：采用琼脂糖亲和介质或者采用免疫亲和层析柱进行所述的亲和纯化。
3. 根据权利要求2所述的过敏原阳性血清的纯化制备方法，其特征在于：所述的琼脂糖亲和介质为Protein-A sepharose CL-4B。
4. 根据权利要求2所述的过敏原阳性血清的纯化制备方法，其特征在于：所述的免疫亲和层析柱为所述的过敏原与琼脂糖凝胶连接成的亲和层析柱。
5. 根据权利要求2或4所述的过敏原阳性血清的纯化制备方法，其特征在于：所述的抗血清先经过硫酸铵处理后，再采用所述的免疫亲和层析柱进行所述的亲和纯化。
6. 根据权利要求1所述的过敏原阳性血清的纯化制备方法，其特征在于：所述的人IgE Fc是将人源IgE溶解木瓜蛋白酶消化液中，再用木瓜蛋白酶消化，再用碘乙酰胺终止消化反应后，用琼脂糖亲和介质提取获得的。
7. 根据权利要求1所述的过敏原阳性血清的纯化制备方法，其特征在于：所述的IgG抗体和所述的人IgE Fc通过2-亚胺四氢噻吩偶联剂或4-(N-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯偶联剂活化后，在pH 7.2～7.4的条件下进行所述的偶联。
8. 根据权利要求7所述的过敏原阳性血清的纯化制备方法，其特征在于：所述的2-亚胺四氢噻吩偶联剂的浓度为9～11 mg/ml，所述的4-(N-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯偶联剂的浓度为4～6 mg/ml。
9. 根据权利要求1所述的过敏原阳性血清的纯化制备方法，其特征在于：采用Sephadex 200凝胶纯化柱进行所述的分离纯化。
10. 根据权利要求1所述的过敏原阳性血清的纯化制备方法，其特征在于：采用含质量比为0.4～0.6%的牛血清白蛋白、pH 7.5～8.5、0.09～0.11mol/L的三羟甲基氨基甲烷缓冲液将所述的IgG-IgE Fc连接物浓溶液进行所述的稀释。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于苏州浩欧博生物医药有限公司，未经苏州浩欧博生物医药有限公司许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201410553626.5/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
