[发明专利]马铃薯立枯丝核菌的分子检测引物及其检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及马铃薯立枯丝核菌的分子检测引物及其检测方法。

背景技术

马铃薯立枯丝核菌是一种威胁我国马铃薯生产的重要土传性病害。其引起的马铃薯溃疡病(苗期)和黑痣病(块茎)，不仅可以大大降低马铃薯产量而且还严重影响其商品性。鉴于该病害在我国马铃薯产区普遍存在，因此，快速、准确的检测技术和方法对于科学防治马铃薯立枯丝核菌病害至关重要。当前关于马铃薯立枯丝核菌的检测还主要以传统分离培养法为主，即采用形态学鉴定结果作为判别依据，然而，这种方法步骤多、周期长，一旦样品分离不当还会导致相应信息的丢失。同时，当马铃薯植物组织被多种真菌复合侵染时，因其生长优势弱于其他真菌，故该菌所造成危害极易被其它真菌症状所掩盖，而传统方法更是难以对其进行分离、鉴定，从而导致判定结果的片面、失准。

发明内容

本发明是要解决传统方法对马铃薯立枯丝核菌病害检测费时、费力且多种真菌复合侵染时难于区分、鉴定的实际问题，提供马铃薯立枯丝核菌的分子检测引物及其检测方法。

本发明的马铃薯立枯丝核菌的分子检测引物，所述的引物序列如序列表Seq ID No：1所示和Seq ID No：2所示。

本发明的马铃薯立枯丝核菌的分子检测方法，它是按照以下步骤进行的：

一、以提取待检测的马铃薯基因组DNA为模板，采用权利要求1的引物，进行PCR扩增，

二、取PCR产物进行凝胶电泳检测，若能够检测出242bp大小的片段，则可判断出所述的马铃薯中存在立枯丝核菌。

本发明包含以下有益效果：

本发明的引物及检测方法为马铃薯立枯丝核菌的检测鉴定提供了一种快速、简便、准确的分子生物学检测方法。相对于传统方法的局限性，本方法操作简单，流程便捷，发明所提供特异性检测引物灵敏度高、重复性及可靠性好，能够满足马铃薯生产中各种检测需求，获得快速、准确的检测结果。

本方法所需耗材、设备均为常规分子生物学用品，成本低、易获取，且对品牌、型号无特殊要求，检测条件极易满足。同时，检测材料及结果保存和运输方便，可根据需要随时开展复检工作。

附图说明

图1为马铃薯立枯丝核菌检测引物特异性验证结果；其中，M：DL2000 Marker；1：无菌水；2：健康马铃薯植物组织；3-5：马铃薯立枯丝核菌标准融合群菌株AG-2-1、AG-3、AG-5；6：致病疫霉菌(晚疫病菌)；7：茄链格孢菌(早疫病菌)；8-10：分别为接骨木镰刀菌、燕麦镰刀菌和茄病镰刀菌蓝色变种；

图2马铃薯立枯丝核菌特异性引物灵敏度检测结果；其中，M：DL2000 Marker；1-11为稀释浓度DNA样品：300ng/ul，100ng/μl，50ng/ul，10ng/μl，lng/μl，100pg/μl，10pg/μl，1pg/μl，100fg/μl，10fg/μl，1fg/μl。

具体实施方式

本发明技术方案不局限于以下所列举具体实施方式，还包括各具体实施方式间的任意组合。

具体实施方式一：本实施方式的马铃薯立枯丝核菌的分子检测引物，所述的引物序列如序列表Seq ID No：1所示和Seq ID No：2所示。

具体实施方式二：本实施方式的马铃薯立枯丝核菌的分子检测方法，它是按照以下步骤进行的：

一、以提取待检测的马铃薯基因组DNA为模板，采用权利要求1的引物，进行PCR扩增；

二、取PCR产物进行凝胶电泳检测，若能够检测出242bp大小的片段，则可判断出所述的马铃薯中存在立枯丝核菌。

具体实施方式三：本实施方式与具体实施方式二不同的是：所述的提取待检测的马铃薯基因组DNA的提取部位为马铃薯根茎或薯块。其它与具体实施方式二相同。

具体实施方式四：本实施方式与具体实施方式二或三不同的是：所述的242bp大小的片段的核苷酸序列为：