[发明专利]预防和控制人呼吸道合胞病毒感染的生物制剂及制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种医药技术领域的新型抗病毒生物制剂，具体是涉及一种预防和控制人呼吸道合胞病毒感染的生物制剂及制备方法。

背景技术

呼吸道合胞病毒Respiratory Syncytial Virus（RSV）是一种含包膜的非节段负链RNA病毒，于1956年被发现。其属于副粘病毒科，肺病毒属。RSV的基因组长15kb，共表达11种蛋白，包括3个跨膜蛋白，F、G和SH，2个非糖基化的基质蛋白M和M2，3个衣壳蛋白N、P、L及2个非结构蛋白NS1和NS2。其中G蛋白和F蛋白参与了呼吸道合胞病毒（RSV）的进入和膜融合过程。并且，Ｇ蛋白和Ｆ蛋白也是诱导产生抗体的主要表位。G蛋白具有高度变异性，而且被高度糖基化，这是RSV容易逃避宿主免疫攻击的一个重要原因。RSV 分为A、B两个亚型，同一亚型的RSV G蛋白基因核苷酸及氨基酸序列同源性可达90%以上。A、B两型交替流行，部分年份以A型流行为主，部分年份以B型流行为主，有些年份呈共流行。

RSV广泛流行于世界各地，是引起婴幼儿下呼吸道感染最常见的病原微生物之一。几乎所有的3岁儿童都经历过1次或多次RSV感染。RSV感染可以引起鼻炎、中耳炎、支气管炎和肺炎。RSV要感染新生儿以及3岁以下的儿童，以及对免疫力较弱的老年人也能够感染。根据世界卫生组（WHO）官方数据，目前每年全世界范围有大约160000人由于感染RSV而死亡。有1.4到6.2万65岁以上的老人需要住院治疗。RSV感染的显著特征是前次感染在人体内产生的抗体不能提供永久保护。在人的整个生命过程可被RSV重复感染。RSV还是引起流行性喘憋性肺炎（简称流喘肺炎）的主要病原。每隔数年就会爆发流行一次喘憋性肺炎，造成数十万人发病，数万人住院，并造成死亡。在气候温和地区，其爆发流行主要集中在雨季。在我国，RSV感染具有显著的特征。在南方，RSV流行高峰主要在炎热的夏季，而北方主要发生在寒冷的冬季。RSV感染在我国不但有散发流行，而且还曾引起数次大规模流行。

由于RSV感染人体后激发的集体免是不完全免疫、RSV A型和B两亚型间的抗原相关性只有25%，另外加之福尔马林灭活疫苗免疫后能引起RSV疫苗诱导增强性疾病等原因，目前并没有有效的疫苗来预防RSV感染。FDA批准治疗RSV的药物有病毒唑和帕利株单抗。病毒唑在治疗RSV上仍然存在很多争议。例如其治疗效果以及副作用的问题。而帕利株主要用在重病感染的婴儿，如先天免疫缺陷等。所以目前也没有一种有效的药物来预防RSV感染。鉴于此，目前研发一种有效、安全的药物对预防RSV感染有很重要的意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种预防和控制人呼吸道合胞病毒感染的生物制剂及制备方法。

本发明是采用如下技术方案实现的：

一种预防和控制人呼吸道合胞病毒感染的生物制剂，包括活性酸酐和分离纯化的蛋白，所述每10g蛋白用0.02～0.03mol的活性酸酐进行修饰，所述蛋白至少包括赖氨酸和/或精氨酸。

所述分离纯化的蛋白优选为人血清白蛋白。

所述人血清白蛋白可用β-乳球蛋白、鸡血清蛋白OVA、兔血清蛋白RSA、猪血清白蛋白PSA、冷水鱼皮明胶G-FS、猪皮明胶G-PS代替。

所述活性酸酐优选为马来酸酐（maleic anhydride，缩写为ML）。

所述马来酸酐可以用马来酸酐衍生物、3-羟基-邻苯二甲酸酐（3-hydroxyphthalicanhydride，缩写为HP）及3-羟基-邻苯二甲酸酐的衍生物、琥珀酸酐（Succinic anhydride，缩写为SU）代替。

上述生物制剂的制备方法，包括如下步骤：

（1）、将活性酸酐溶于溶剂中得到饱和的酸酐溶液；

（2）、将分离纯化的蛋白溶于pH8～9的0.1 M磷酸钠溶液中，得到蛋白终浓度为20mg/mL的蛋白溶液；

（3）、将酸酐溶液分多次加入蛋白溶液中，每次加完后充分混匀，且调节pH至8～9。酸酐在反应体系中的终浓度为40～60mM；

（4）、在温度为20～30℃的条件下，静置1-3小时，然后用pH 7～8的PBS溶液透析后过滤除菌，即可制得成品。

本发明为多肽蛋白类病毒进入/融合抑制剂，作用于病毒入侵靶细胞的第一阶段，阻断了病毒对细胞的感染，从而达到预防和控制病毒的效果。使用一种活性酸酐来修饰一种分离和纯化的蛋白质表面带正电荷的氨基酸，从而使其具有阻断人呼吸道合胞病毒RSV进入和感染靶细胞的功能。