[发明专利]一种测定污水厂二级出水中低浓度蛋白质的方法

权利要求书

1.一种测定污水厂二级出水中低浓度蛋白质的方法，其步骤为：

(a)制备试剂：将Na₂CO₃和NaOH溶解于蒸馏水中得到试剂甲，将CuSO₄·5H₂O和酒石酸锑钾溶解于蒸馏水中得到试剂乙，试剂甲和试剂乙混合得到试剂丙，将福林酚与蒸馏水按体积比为3:1配制得到福林酚使用液；

(b)建立数学模型：利用Minitab响应面法建立牛血清蛋白BSA和腐殖酸HS的浓度与对应吸光度值之间的数学模型，具体步骤为：

(1)用蒸馏水分别配制BSA标准液和HS标准液，备用；

(2)利用Minitab设计至少12组含有不同浓度BSA和HS的样品，其中BSA的浓度范围为0.5-25 mg/L，HS的浓度范围为2-25 mg/L；

(3)用步骤(1)中配制的BSA标准液和HS标准液按照步骤(2)中设计的浓度配制样品；

(4)将步骤(3)中配制的样品每组分别取2.5 mL于试管中，然后往试管中加入2.5 mL步骤(a)中配制的试剂甲，在旋涡混合器上迅速混合，在室温放置10分钟后，向其加入0.3mL步骤(a)中配制的福林酚使用液并立即混匀，在室温下放置45分钟后，测定其在750 nm处的吸光度值A₁，利用Minitab响应面法拟合得到吸光度A₁与BSA和HS浓度关系的线性方程1：A₁＝k₁+m₁*C_BSA+n₁*C_HS，其中k₁、m₁和n₁是二元线性回归方程系数，C_BSA和C_HS分别代表BSA和HS的浓度；

(5)将步骤(3)中配制的样品每组分别取2.5 mL于试管中，然后往试管中加入2.5 mL步骤(a)中配制的试剂丙，在旋涡混合器上迅速混合，于室温放置10分钟后加入0.3 mL步骤(a)中配制的福林酚使用液并立即混匀，在室温下放置45分钟后，测定其在750 nm处的吸光度值A₂，利用Minitab响应面法拟合得到吸光度A₂与BSA和HS浓度关系的线性方程2：A₂＝k₂+m₂*C_BSA+n₂*C_HS，其中k₂、m₂和n₂是二元线性回归方程系数，C_BSA和C_HS分别代表BSA和HS的浓度；

(6)由步骤(4)中得到的线性方程1和步骤(5)中得到的线性方程2可以计算得到BSA浓度与吸光度值A₁和A₂之间的关系为：C_BSA＝(k₂*n₁-k₁*n₂+n₂*A₁-n₁*A₂)/(m₁*n₂-m₂*n₁)；

(c)预处理样品：将污水厂二级出水依次用滤膜和透析袋进行预处理去除污水中的悬浮物和杂质离子；

(d)测定蛋白质浓度：取2.5 mL经过步骤(c)预处理得到的水样于两只试管中，一只试管中加入2.5 mL步骤(a)中配制的试剂甲，在旋涡混合器上迅速混合，于室温放置10分钟后加入0.3 mL步骤(a)中配制的福林酚使用液并立即混匀，在室温下放置45分钟后，测定其在750 nm处的吸光度值，另一只试管中加入2.5 mL步骤(a)中配制的试剂丙，在旋涡混合器上迅速混合，于室温放置10分钟后加入0.3 mL步骤(a)中配制的福林酚使用液并立即混匀，在室温下放置45分钟后，测定其在750 nm处的吸光度值，根据测得的吸光度值利用步骤(b)中建立的数学模型计算出该水样的蛋白质浓度。