[发明专利]一种适用于检测萝卜叶缘裂刻性状的分子标记及应用有效

专利信息
申请号: 201410566923.3 申请日: 2014-10-22
公开(公告)号: CN104313149A 公开(公告)日: 2015-01-28
发明(设计)人: 熊秋芳;张雪丽;张小康;张雪清;徐长城 申请(专利权)人: 武汉市蔬菜科学研究所
主分类号: C12Q1/68 分类号: C12Q1/68;C12N15/11;C12N15/10
代理公司: 武汉宇晨专利事务所 42001 代理人: 张红兵
地址: 430345 湖北省武*** 国省代码: 湖北;42
权利要求书: 查看更多 说明书: 查看更多
摘要:
搜索关键词: 一种 适用于 检测 萝卜 叶缘裂刻 性状 分子 标记 应用
【权利要求书】:

1.一种适用于检测萝卜叶缘裂刻性状的分子标记,它的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:1所示。

2.一种扩增权利要求1所述的分子标记的引物对,其DNA序列如下所示:

正向引物5’-ACTGGTTATCTTGTGGTGATGGAAAC-3’,

反向引物5’-AAGTCGGTTTGGATAAGCATAGGGGG-3’。

3.一种制备检测萝卜叶缘裂刻性状的分子标记的方法,其特征在于下列步骤:

1)以萝卜“武青一号”为母本,以萝卜“新洲花叶”为父本进行杂交得到杂种F1,将所得的F1植株套袋自交、回交,得到F2和BC1分离群体;

2)采用集体混合法构建萝卜叶浅裂DNA池和叶全裂DNA池;

3)将两亲本间有差异的引物对,对上述步骤2)构建的两个基因池进行PCR扩增,选择在两个基因池中表现有差异的引物组合EA1/MC8、EA3/MC4、EA4/MC4进一步对基因池间各单株的基因组DNA进行PCR扩增和电泳检测,确定筛选出的引物组合EA1/MC8为叶缘裂刻性状的连锁标记,再对F2分离群体的DNA样品进行PCR扩增和电泳检测;

其中:

两亲本间有差异的引物对的DNA序列如下所示:

EA1:5’-GAC TGC GTA CCA ATT CAA A-3’    MC8:5’-GAT GAG TCC TGA GTA ACT G-3’;

EA2:5’-GAC TGC GTA CCA ATT CAA T-3’    MG7:5’-GAT GAG TCC TGA GTA AGT C-3’;

EA2:5’-GAC TGC GTA CCA ATT CAA T-3’    MC6:5’-GAT GAG TCC TGA GTA ACT T-3’;

EA2:5’-GAC TGC GTA CCA ATT CAA T-3’    MC7:5’-GAT GAG TCC TGA GTA ACTC-3’;

EA3:5’-GAC TGC GTA CCA ATT CAA C-3’    MC3:5’-GAT GAG TCC TGA GTA ACA C-3’;

EA3:5’-GAC TGC GTA CCA ATT CAA C-3’    MC2:5’-GAT GAG TCC TGA GTA ACA T-3’;

EA3:5’-GAC TGC GTA CCA ATT CAA C-3’    MC4:5’-GAT GAG TCC TGA GTA ACA G-3’;

EA3:5’-GAC TGC GTA CCA ATT CAA C-3’    MC6:5’-GAT GAG TCC TGA GTA ACT T-3’;

EA3:5’-GAC TGC GTA CCA ATT CAA C-3’    MC12:5’-GAT GAG TCC TGA GTA ACC G-3’;

EA3:5’-GAC TGC GTA CCA ATT CAA C-3’    MC14:5’-GAT GAG TCC TGA GTA ACG T-3’;

EA4:5’-GAC TGC GTA CCA ATT CAA G-3’    MC1:5’-GAT GAG TCC TGA GTA ACA A-3’

EA4:5’-GAC TGC GTA CCA ATT CAA G-3’    MC2:5’-GAT GAG TCC TGA GTA ACA T-3’;

EA4:5’-GAC TGC GTA CCA ATT CAA G-3’    MC4:5’-GAT GAG TCC TGA GTA ACA G-3’;

EA4:5’-GAC TGC GTA CCA ATT CAA G-3’    MC5:5’-GAT GAG TCC TGA GTA ACT A-3’;

EA4:5’-GAC TGC GTA CCA ATT CAA G-3’    MC11:5’-GAT GAG TCC TGA GTA ACC C-3’;

EA4:5’-GAC TGC GTA CCA ATT CAA G-3’    MC16:5’-GAT GAG TCC TGA GTA ACG G-3’;

EA5:5’-GAC TGC GTA CCA ATT CAT A-3’    MC6:5’-GAT GAG TCC TGA GTA ACT T-3’;

EA5:5’-GAC TGC GTA CCA ATT CAT A-3’    MC7:5’-GAT GAG TCC TGA GTA ACT C-3’;

EA5:5’-GAC TGC GTA CCA ATT CAT A-3’    MC8:5’-GAT GAG TCC TGA GTA ACT G-3’;

EA5:5’-GAC TGC GTA CCA ATT CAT A-3’    MG16:5’-GAT GAG TCC TGA GTA AGG G-3’;

EA6:5’-GAC TGC GTA CCA ATT CAT T-3’    MC14:5’-GAT GAG TCC TGA GTA ACG T-3’;

EA6:5’-GAC TGC GTA CCA ATT CAT T-3’    MC15:5’-GAT GAG TCC TGA GTA ACG C-3’;

EA6:5’-GAC TGC GTA CCA ATT CAT T-3’    MG8:5’-GAT GAG TCC TGA GTA AGT G-3’;

EA6:5’-GAC TGC GTA CCA ATT CAT T-3’    MG13:5’-GAT GAG TCC TGA GTA AGG T-3’;

EA7:5’-GAC TGC GTA CCA ATT CAT C-3’    MG13:5’-GAT GAG TCC TGA GTA AGG T-3’;

EA7:5’-GAC TGC GTA CCA ATT CAT C-3’    MG15:5’-GAT GAG TCC TGA GTA AGG C-3’;

EA8:5’-GAC TGC GTA CCA ATT CAT G-3’    MC7:5’-GAT GAG TCC TGA GTA ACT C-3’;

EA8:5’-GAC TGC GTA CCA ATT CAT G-3’    MG9:5’-GAT GAG TCC TGA GTA AGC A-3’;

EA11:5’-GAC TGC GTA CCA ATT CAC C-3’   MC6:5’-GAT GAG TCC TGA GTA ACT T-3’;

EA14:5’-GAC TGC GTA CCA ATT CAG T-3’   MG16:5’-GAT GAG TCC TGA GTA AGG G.-3’

4)将步骤3)筛选得到的与萝卜叶缘缺刻性状紧密连锁的AFLP标记引物组合EA1/MC8的片段进行回收、克隆、测序,所得的PCR扩增产物的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:1所示;

其中:EA1/MC8引物组合的序列如下:

EA1:5’-GAC TGC GTA CCA ATT CAA A-3’,

MC8:5’-GAT GAG TCC TGA GTA ACT G-3’。

5)通过对步骤4)测序结果进行特异引物的设计,将筛选得到的与萝卜叶缘缺刻性状紧密连锁的AFLP标记转化为SCAR标记引物,该SCAR标记引物的DNA序列如下所示;

正向引物5’-ACTGGTTATCTTGTGGTGATGGAAAC-3’,

反向引物5’-AAGTCGGTTTGGATAAGCATAGGGGG-3’。

下载完整专利技术内容需要扣除积分,VIP会员可以免费下载。

该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息,商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于武汉市蔬菜科学研究所,未经武汉市蔬菜科学研究所许可,擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作,请联系【客服

本文链接:http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201410566923.3/1.html,转载请声明来源钻瓜专利网。

×

专利文献下载

说明:

1、专利原文基于中国国家知识产权局专利说明书;

2、支持发明专利 、实用新型专利、外观设计专利(升级中);

3、专利数据每周两次同步更新,支持Adobe PDF格式;

4、内容包括专利技术的结构示意图流程工艺图技术构造图

5、已全新升级为极速版,下载速度显著提升!欢迎使用!

请您登陆后,进行下载,点击【登陆】 【注册】

关于我们 寻求报道 投稿须知 广告合作 版权声明 网站地图 友情链接 企业标识 联系我们

钻瓜专利网在线咨询

周一至周五 9:00-18:00

咨询在线客服咨询在线客服
tel code back_top