[发明专利]miRNA‑200b在制备β‑catenin抑制剂的新用途

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学领域，具体涉及一种调节基因表达的非编码核酸，更具体的涉及miR-200b的新用途。

背景技术

microRNAs(miRNAs)是近年来研究发现的一类长度约22-24个核苷酸的非编码小分子RNA，是非编码小RNA(non-coding small RNA)家族中迄今研究最多的成员。目前认为miRNA主要通过以下两方面的机制介导转录后基因调节：mRNA 的降解和翻译抑制。具体哪种作用方式取决于miRNA和靶mRNA互补配对的程度。miRNA能调控多种生物学过程，包括细胞周期、凋亡、分化发育和新陈代谢等，它在疾病发病和进展中所显现的治疗潜力已引起人们极大的兴趣。越来越多的证据表明，以miRNA为基础的基因治疗，不管是增强或抑制miRNA的表达和活性，都有很大的应用前景。尽管miRNA的生物合成和具体机制还有许多有待我们去探索，但已有足够的证据表明miRNAs在不同组织和疾病的表达存在差异。通过研究人类疾病中一些miRNA的异常表达，比如癌症，中枢神经系统疾病，感染性疾病，心血管疾病，代谢性疾病，和自身免疫性疾病，可以帮助我们开发新的基因治疗途径。

miR-200家族是由两个簇的五个成员：miRs-200b/c/429和miRs-200a/141 组成的。在人类miR-200家族定位在l号和12号染色体上，在小鼠类定位在4 号和6号染色体上。miR-200家族中的五个成员拥有高度相似的种子序列， miRs-200b/c/429的种子序列为AAUCU，miRs-200a/141的种子序列为 AACACU。目前对miR-200家族的研究主要集中在miR-200家族在上皮间质转化转化和恶性肿瘤转移中的作用。

本发明旨在研究miR-200b在缺氧缺血性脑损伤的组织中与β-catenin的关系。发明首先建立新生大鼠缺氧缺血性脑损伤模型，进行相应组的miRNA激动剂或拮抗剂转染，分别过表达和低表达miR-200b，于不同时间点取大鼠脑组织检测β-catenin蛋白的变化趋势，从而了解miR-200b对β-catenin的作用。结果显示转染miR-200b后，β-catenin蛋白表达降低，拮抗miR-200b后，β-catenin蛋白表达进一步升高，说明miR-200b可能通过介导β-catenin参与缺氧缺血性脑损伤的修复作用。本发明提供了miR-200b的新应用，即miR-200b在缺氧缺血性脑损伤组织中可以有效的调节β-catenin蛋白的表达，这对缺氧缺血性脑损伤组织修复具有重要的意义。

发明内容

本发明的目的在于提供miRNA-200b在制备β-catenin蛋白表达抑制剂中的应用。

所述miRNA-200b成熟序列为mmu-mir-200b-3p(miRBase登录号为 MIMAT0000233)。

术语“miRNA”(微小RNA)是指任何类型的干扰RNA，包括但不限于，内源微小RNA和人工微小RNA。内源miRNA是在基因组中天然存在的小RNAs，其能够调节mRNA的生产利用。术语“人工的”或“合成的”miRNA包括除内源 miRNA之外的任何类型的RNA序列，其能够调节mRNA的生产利用。

本发明中miRNA-200b、miR-200b、microRNA-200b属于同一物质的不同表达形式，所代表的意思相同。

进一步，所述的miRNA可以经化学修饰的合成RNA。所述的化学修饰包括糖基修饰、磷酸链修饰、碱基修饰、突出和末端修饰、双螺旋结构修饰等。

核糖上的修饰最为广泛，因为2’-OH不是活性siRNA所必需的。RNA的2’-O 甲基化可以提高结合亲和力和抗核酸酶的稳定性，并且在双螺旋中有很好的相容性，这些优点使其成为应用最为广泛的修饰之一。2’-O-甲氧乙基修饰已经用于一个siRNA的3’端突出和正义链上，但不适用于反义链。2’-O-烯丙基修饰除了可以应用在3’端突出外，其他大部分位点修饰都会引起活性降低。siRNA双链上 70％的2’-OH被随机替换为2，4-二硝基苯基醚可以改善其诸多性质，如高亲和性、抗核酸酶稳定性和效价。

2’-F-RNA在正义链和反义链上的部分取代都是可以耐受的，有些全取代的 siRNA同样具有活性。此外，2’-F-RNA修饰还大大提高siRNA的血浆稳定性，改善双螺旋的结合亲和性。改变2’-F-RNA的氟原子的立体化学得到2’-F-ANA，它在siRNA双螺旋中也有很好的耐受性，包括对正义链的全修饰和反义链的部分修饰，它的引入也带来高亲和性和抗核酸酶稳定性。