[发明专利]siRNA、互补寡聚DNA、PGC-1抑制剂、其制备方法及用途

权利要求书

1.一种用于抑制PGC-1基因的siRNA，其特征在于，所述siRNA具有 如下所示的核苷酸序列：

正义链：5’-cgacuuggauacagacagcAA-3’；

反义链：5’-AAgcugaaccuaugucugucg-3’。

2.一种用于制备PGC-1基因抑制剂的互补寡聚DNA，其特征在于，所 述互补寡聚DNA具有如下(I)或(II)任意之一所示的核苷酸序列：

反义靶序列正义靶序列

5’-GTAGAAgctgaacctatgtctgtcgTCAAGAGcgacttggatacagacagcAA-3’；

(I)

反义靶序列正义靶序列

5’-CTAGAAgctgaacctatgtctgtcgCTCTTGAcgacttggatacagacagcAA-3’。

(II)

3.一种用于制备PGC-1基因抑制剂的互补寡聚DNA，其特征在于，所 述互补寡聚DNA具有如下(III)或(IV)任意之一所示的核苷酸序列：

反义靶序列正义靶序列

5’-AGCTgctgaacctatgtctgtcgTCAAGAGcgacttggatacagacagcAA-3’；

(III)

反义靶序列正义靶序列

5’-AGCTgctgaacctatgtctgtcgCTCTTGAcgacttggatacagacagcAA-3’。

(IV)

4.一种用于制备PGC-1基因抑制剂的重组表达载体质粒，其特征在 于，所述重组表达载体质粒可以产生如权利要求1所述的siRNA，优选地， 所述质粒为PBI121。

5.一种用于制备PGC-1基因抑制剂的农杆菌，其特征在于，所述农杆 菌使用如权利要求4所述的重组表达载体质粒直接转化，优选地，所述农杆 菌为根癌农杆菌，更优选为GV3101、LBA4404或EHA105菌株。

6.一种用于制备PGC-1抑制基因重组真核表达载体质粒的方法，其特 征在于，所述方法包括如下步骤；

(1)通过权利要求3所述的互补寡聚DNA经两两混合、退火，形成 双链DNA；

(2)将步骤(1)退火得到的双链DNA稀释后，连接至真核表达质粒 载体即制得所述PGC-1抑制基因重组真核表达载体质粒；优选地，所述重组 真核表达载体质粒是通过T4连接酶与经过HindIII酶切的pcDNA3.1质粒室 温连接得到的重组pcDNA3.1质粒。

7.一种通过植物制备PGC-1基因抑制剂的方法，其特征在于，所述方 法包括如下步骤；

(1)针对PGC-1目的基因序列确定目的基因片段，优选地，所述目的 基因片段具有如下所示的核苷酸序列：

5’-cgacttggatacagacagc-3’；

(2)将步骤(1)中所述目的基因片段合成为寡聚DNA并连入质粒，通 过质粒导入农杆菌中；优选地，所述目的基因通过PCR扩增法导入农杆菌 或通过权利要求2所述的互补寡聚DNA构建质粒直接转化到农杆菌中；和/ 或优选地，所述农杆菌为根癌农杆菌，进一步优选为GV3101、LBA4404或 EHA105菌株；

(3)使用步骤(2)中包含所述目的基因片段的农杆菌侵染植物，优选 地，所述植物选自生菜、胡萝卜、黄瓜、白菜；

(4)从步骤(3)中的侵染植物中提取PGC-1基因的siRNA抑制剂， 所述siRNA抑制剂为根据权利要求1所述的siRNA。

8.一种根据权利要求7所述的方法制得的PGC-1基因抑制剂，其特征 在于，所述PGC-1基因抑制剂包含根据权利要求1所述的siRNA。

9.如权利要求8所述的PGC-1基因抑制剂，其特征在于，所述PGC-1 基因抑制剂包括PGC-1抑制基因重组真核表达载体质粒。

10.根据权利要求1所述的siRNA和/或根据权利要求2或3所述的互 补寡聚DNA在制备PGC-1基因抑制剂和/或用于改善疾病引起的PGC-1上 调产生的不良反应的药物中的应用。