[发明专利]贝氏柯克斯体抗体的检测试纸、试纸制备方法及试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及生物检测试剂领域，特别涉及一种贝氏柯克斯体抗体的检测试纸、试纸制备方法及试剂盒。

背景技术

目前针对贝氏柯克斯体(Coxiella burnetii，俗称Q热立克次体)抗体的检测技术主要是ELISA、化学发光、胶体金等免疫学方法，其中，ELISA检测方法需要反复清洗、拍板，并要求风光光度仪器进行吸光度的检测，且耗时比较长；化学发光法中需要的荧光试剂比较昂贵，检测需要特定的荧光分析仪器；胶体金检测方法适合现场检测，但检测灵敏度受到限制，主要是由于胶体金连接了待标记抗体或待标记蛋白之后，很不稳定，很容易因电荷的变化使得抗体脱离，造成每个胶体金的标记抗体量大大减少，从而造成灵敏度的降低。并且，胶体金试剂的制备采用氯金酸，试剂成本比较高，导致免疫层析试纸的总体成本比较高。

ELISA、化学发光、胶体金等免疫学检测方法最关键的一个因素是抗原抗体的选择，如果直接采用贝氏柯克斯体培养液制备抗原，存在抗原成分复杂、有效抗原的含量低、杂蛋白多、免疫原性差以及生物安全风险性高等问题，而且用于免疫学检测时，容易导致阳性结果。

发明内容

本发明的目的是针对上述现有技术的不足，提供一种快速检测贝氏柯克斯体抗体的检测试纸、试纸的制备方法及其检测试剂盒。该检测试剂盒不需要专业技术人员即可完成检测工作，也不需要专门的检测仪器即可判断检测结果，并且该检测试剂盒具有较高的灵敏度。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种贝氏柯克斯体抗体的检测试纸，由样品垫、Fe₃O₄磁性纳米颗粒载体垫、硝酸纤维素膜、吸水垫依次搭接并贴在底衬卡组成，所述Fe₃O₄磁性纳米颗粒载体垫为固定有金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)标记磁性纳米颗粒的玻璃纤维膜；所述硝酸纤维素膜设有检测带和质控带，所述检测带包被有贝氏柯克斯体抗原；所述质控带包被能与SPA结合的抗体。

如上所述的检测试纸，优选地，所述Fe₃O₄磁性纳米颗粒的粒径为5nm～500nm。

如上所述的检测试纸，优选地，所述贝氏柯克斯体抗原的基因序列如SEQ ID NO.1所示。

如上所述贝氏柯克斯体抗体检测试纸的制备方法，优选地，该方法包括：

(1)、利用贝氏柯克斯体抗原的基因序列如SEQ ID NO.1所示，制备贝氏柯克斯体抗原；

(2)、SPA标记羧基化处理的Fe₃O₄磁性纳米颗粒，喷涂于玻璃纤维膜上，制备Fe₃O₄磁性纳米颗粒载体垫；

(3)、包被硝酸纤维素膜，将步骤(1)获得的贝氏柯克斯体抗原和羊抗兔IgG分别包被于硝酸纤维素膜上作为检测带和质控带；

(4)、处理样品垫；

(5)、试纸条的组装：将步骤(4)处理后的样品垫、步骤(2)SPA标记的Fe₃O₄磁性纳米颗粒载体垫、步骤(3)包被后的硝酸纤维素膜、吸水垫依次贴在底衬卡上，获得贝氏柯克斯体抗体检测试纸。

如上所述贝氏柯克斯体抗体检测试纸的制备方法，优选地，所述步骤(4)处理样品垫步骤为：将含有体积比0.5％～2％的吐温20、pH＝7.0～7.7的PBS，喷涂于样品垫上，烘干或自然干燥后待用。

如上所述贝氏柯克斯体抗体检测试纸的制备方法，优选地，所述步骤(5)中吸水垫为吸水纸或纯棉绒浆滤纸。

本发明还提供了一种贝氏柯克斯体抗体检测试剂盒，该试剂盒包括，如上所述的检测试纸和辣根过氧化物酶底物。

如上所述的检测试剂盒，优选地，所述辣根过氧化物酶底物为邻苯二胺(OPD)体系、四甲基联苯胺(TMB)体系、3.3－二氨基联苯胺(DAB)体系或2.2'-边氮基-双3-乙基苯并噻吡咯啉-6磺酸(ABTS)体系中的任一种。上述的辣根过氧化物酶底物的体系当中均含有过氧化氢。

如上所述的检测试剂盒，优选地，所述四甲基联苯胺体系包括：四甲基联苯胺和过氧化氢，所述四甲基联苯胺的质量浓度为0.01mg/ml～10mg/ml，所述过氧化氢的摩尔浓度为0.25m mol/L～1.2m mol/L。

如上所述的检测试剂盒，优选地，所述四甲基联苯胺体系的配制方法如下：a)先将四甲基联苯胺溶于二甲基亚砜，再将加入蒸馏水定容，获得A液；