[发明专利]一种基于循环酶法的标记方法及其应用

权利要求书

1.一种基于循环酶法的标记方法，其特征在于：以可用循环酶法进行检测的物质作为标记物，标记待检测物的抗原或抗体。

2.如权利要求1所述的标记方法，其特征在于：所述标记物为总胆汁酸、同型半胱氨酸、腺苷脱氨酶、糖化血红蛋白或单胺氧化酶，优选为同型半胱氨酸或总胆汁酸。

3.权利要求1或2所述的标记方法在血清中低含量抗原或抗体的免疫学检测中的应用，其特征在于方法如下：

1)以待检测物的抗原或抗体包被的磁颗粒作为固相载体，与待检测物的样本溶液混匀，反应；

2)向上述1)溶液中加入标记物标记的待检测物的抗原或抗体溶液，混匀，反应；

3)对上述2)得到的体系进行分离，洗涤，重悬；

4)以循环酶法检测方法为基础，对重悬后的溶液进行检测，利用循环酶法检测试剂盒检测标记物的含量，从而间接得出待检测物的含量。

4.如权利要求3所述的应用，其特征在于：所述磁颗粒是指以四氧化三铁为内核、表面包裹带有氨基、羧基、巯基或其他易于偶联的活性基团的聚合物。

5.如权利要求4所述的应用，其特征在于：所述磁颗粒直径为5nm-1μm。

6.权利要求3所述的应用，其特征在于：用于血清中低含量抗原或抗体的检测，包括：胰蛋白酶原2、附睾蛋白4、降钙素原、乙肝抗体和HIV抗体。

7.利用权利要求1或2所述的标记方法检测血清中低含量抗原或抗体的检测试剂盒，其特征在于：包括待检测物的校准品、待检测物的抗原或抗体包被的磁颗粒溶液、浓缩洗涤液、可用循环酶法检测的底物标记的待检测物的抗原或抗体溶液和可用循环酶法检测的底物的检测试剂盒。

8.如权利要求7所述的检测试剂盒，其特征在于：所述校准品的原料为标准级，纯度不低于90％；所述待检测物的抗原为基因工程重组制备的抗原或天然抗原或化学偶联反应得到的抗原，所述待检测物的抗体为单克隆抗体，所述待检测物的抗原和所述待检测物的抗体的纯度不低于95％；所述浓缩洗涤液为磷酸缓冲液。

9.如权利要求7或8所述的试剂盒，其特征在于：所述的可用循环酶法检测的底物标记的待检测物的抗原或抗体溶液的制备方法如下：将待检测物的抗原或抗体于MES缓冲液中2-8℃透析过夜，向待检测物的抗原或抗体溶液中加入可用循环酶法检测的底物溶液，室温下反应，之后转入透析袋内并于MES缓冲液中2-8℃透析过夜，加入甘油后于-20℃避光保存备用。

10.如权利要求9所述的试剂盒，其特征在于：所述待检测物的抗原或抗体与所述可用循环酶法检测的底物的质量比为1:10-50。