[发明专利]一种用于抑制和治疗细粒棘球蚴病的干扰RNA及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种干扰RNA及其用来抑制和治疗细粒棘球蚴病的应用，属于生物医药工程领域。

背景技术

棘球蚴病(echinococcosis)俗称包虫病(hydatid disease)，是棘球蚴绦虫的中绦期幼虫寄生于人及其他一些动物体内所引起的一种严重危害人体健康和畜牧业发展的人畜共患寄生虫病。棘球绦虫的种类较多，目前在我国主要有细粒棘球蚴病(囊型包虫病cystic echinococcosis，CE)和多房棘球蚴病(泡型包虫病alveolar echinococcosis，AE)两种，其分别由细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus，E.g)和多房棘球绦虫(Echinococcus multilocularis，E.m)寄生于人及某些动物体内所致。细粒棘球蚴病呈全球性分布，在我国主要流行于新疆、青海、内蒙古、西藏等畜牧业发达的省区。

细粒棘球蚴可寄生于人体任何部位，其中肝脏最为常见(50-70％)，其次为肺脏(占20％～30％)，在脾，肾，骨，脑及其他器官中较少见到。目前，对于肝细粒棘球蚴病的治疗，仍然以外科手术为主，药物治疗为辅。对于手术治疗方式而言，一个严重的缺陷是穿刺内囊摘除过程中易引起内囊里的原头节外溢，复发率较高。即使近些年出现的肝包虫外膜内外囊完整摘除术可完整摘除肝包虫外囊，降低包虫病的复发率，但是当包虫囊肿体积较大或紧贴重要脏器或管道(肝门或胆管)时，则需要选择开放式外膜内完整摘除术。此种术式有两种情况：一是开放式外膜内外囊完全切除术，二是开放式外膜内外囊次全切除术，这两种情况都可能有头节的外漏和残留，增加术后复发的风险。因此本领域近年来已经开始尝试使用药物制剂来降低复发率。

迄今为止，国内外已经在体外、动物及临床上对95％乙醇，高渗盐水，5％的福尔马林，硝酸银及阿苯达唑等药物及其联合作用效果方面进行了广泛的研究，它们虽然可以起到一定的疗效，但都不尽理想且副作用较大：95％的乙醇可导致机体出现严重的肝胆并发症，20％的高渗盐水会使病人出现严重的肝胆并发症，10％H₂O₂会致使机体出现空气栓赛甚至会发生过敏性休克，福尔马林使用后会产生严重的肝胆并发症，20％的硝酸银可致使病人出现术中休克，心血管功能衰竭，肾功能衰竭，肝功能不全等副作用，术后发生呼吸困难，紫绀，低血压等一系列副作用，阿苯达唑(ABZ)临床上病人使用后，肝酶水平会因此而上升，高浓度酸性和碱性溶液尽管能有效杀灭，但是无法在人体内应用，而低浓度的酸性和碱性溶液杀灭效果不理想。

根据制药领域的认知，理想的局部化疗药物应具有快速，完整的药物作用效果(没有局限性和副作用)，从这个角度来看，目前还没有发现理想的局部化疗药物。因此，寻找理想的局部辅助用药的化疗药物对于肝包虫病的治疗具有重要意义。

发明内容

申请人多年来致力于研究细粒棘球蚴病在细胞和基因层面的致病机理，发现在细粒棘球蚴病中细粒棘球蚴原头节存在GRP78蛋白(分子伴侣葡萄糖调节蛋白78，glucose-regulated protein78/binding immunoglobulin protein，GRP78)的高表达，从而确定内质网应激反应参与细粒棘球蚴发病。基于该致病机理，申请人研究了通过抑制GRP78表达从而影响内质网应激机制来抑制和杀灭细粒棘球蚴原头节的生长，从而有效治疗细粒棘球蚴病。

基于上述，本发明首先公开了一种干扰RNA(可简称为siRNA或RNAi)，能够特异性的靶向细粒棘球绦虫的GRP78基因从而使其沉默从而特异性下调GRP78的表达，用于抑制和治疗细粒棘球蚴病，所述干扰RNA的靶序列为CCTCGTGGTTTACCTCAAA。

由于上述作用机制的存在，在另一面，本发明还公开了干扰RNA在制备治疗细粒棘球蚴病的药物中的应用，所述干扰RNA的靶序列CCTCGTGGTTTACCTCAAA。

具体到临床应用，可以将干扰RNA作为药物活性成分直接进入病灶来防治细粒棘球蚴病，例如在手术过程中注射的方式，通常的，干扰RNA通过浸泡或转染的方式进入细粒棘球绦虫，从而消灭其生长过程。

优选的，通过电穿孔转染的方法将干扰RNA对细粒棘球蚴原头节进行转染，上述电转方法是本领域技术人员所广泛了解的，例如通过电转仪进行。