[发明专利]松果菊苷在抗肿瘤药物中的应用

说明书

技术领域

本发明属于中药应用领域，具体涉及松果菊苷在制备抗肿瘤药物中的应用。

背景技术

癌症是导致动物和人类死亡的最主要的原因，严重威胁着人类的生命和健康。人们一直为获得有活性并且安全施用于癌症患者的抗肿瘤药物不懈努力。我们首次发现松果菊苷能抑制抑制肿瘤细胞中维持生存的特异性酶MTH1，导致氧化的核苷酸掺入到DNA中，致使癌细胞发生致死性的DNA双链断裂，以此来产生抗肿瘤作用。

中医中药抗病毒已有数千年的历史，我国在利用中药防治流感方面积累了大量宝贵的理论和实践经验。在我国，中药资源非常丰富，从古至今用中医药治疗流感疗效显著。但在国外，由于中药中有效成分不明，作用原理不清，所以使中药的发展在国外受阻。现在单体中药抗肿瘤的研究已经有数十年了，已经筛选出很多具有抗肿瘤的中草药。所以，我们从天然产物中获得了新颖的具有MTH1抑制活性的化合物——松果菊苷，以此来寻找抑制维持肿瘤细胞生存的MTH1，从而研发出具有抗肿瘤活性的新药物。

发明内容

本发明的目的在于提供松果菊苷在制备抗肿瘤药物中的应用。松果菊苷能够有效的抑制MTH1的活性，从而阻断肿瘤细胞清除氧化的核苷酸，使之渗入到DNA中致使肿瘤细胞发生致死性的DNA双链断裂，从而达到治疗癌症患者的作用。本发明对化合物松果菊苷对MTH1进行了体外酶学抑制性的检测，发现其对MTH1酶学水平的IC₅₀为7.42±2.13μmol/L。我们又通过MTT实验检测松果菊苷在细胞水平对肿瘤细胞的作用。最终确定松果菊苷对SW480人结肠癌细胞和和U2OS人骨肉瘤细胞都有显著抑制作用。本发明为开发以MTH1为靶点的抗肿瘤新药提供基础，为松果菊苷应用于人类癌症的治疗提供了参考。

附图说明

图1是不同浓度松果菊苷对MTH1蛋白的抑制作用

图2是不同浓度松果菊苷在24小时、48小时对SW480人结肠癌细胞的抑制作用

图3是不同浓度松果菊苷在24小时、48小时对U2OS人骨肉瘤细胞的抑制作用

具体实施方式

以下通过实例形式的具体实施方式对本发明作进一步的详细说明。

实施例1

我们将MTH1，无机焦磷酸酶和dGTP加入到反应液(100mM pH8.0Tris-醋酸,40mM NaCI,10mM醋酸镁，0.005％Tween20和1mMDTT)中。各成分终浓度是1nM MTH1，100μM dGTP和0.2U ml-1无机焦磷酸酶，松果菊苷浓度为3μM、6μM、9μM、12μM、15μM，实验在96孔板中进行体积为100μl。酶和底物室温孵育1小时，加入25μl孔雀石绿溶液终止反应，在630nm处测定吸光度。

从图1中可以看出，在酶学实验中松果菊苷对MTH1有较好的抑制作用，并且抑制作用随药物浓度增加呈现剂量依赖。松果菊苷对MTH1的半数抑制浓度(IC₅₀)为7.42±2.13μmol/L。

实施例2

为了检测松果菊苷在细胞水平对肿瘤细胞的作用，我们选用SW480人结肠癌细胞和和U2OS人骨肉瘤细胞两种不同细胞进行实验。首先将松果菊苷按浓度梯度稀释成不同浓度，在96孔板铺适量适量细胞，当生长密度达到80％左右时加入松果菊苷，终浓度分别为15μM、25μM、35μM、45μM、55μM、65μM、75μM、85μM、95μM，反应体积为100μl，药物作用24小时后，加入MTT反应4小时，加入150μl DMSO，酶标仪630nm检测吸光值。上述实验均在37℃、5％CO₂条件下培养。

结果如图2和图3所示，加入松果菊苷后，随着松果菊苷浓度的增加，细胞存活率随之降低。说明松果菊苷可以抑制SW480和U2OS肿瘤细胞的生长，且抑制作用也随松果菊苷浓度的增加呈现浓度依赖性和时间依赖性。松果菊苷对SW480细胞最高抑制率可以达到90％以上，对U2OS细胞最高抑制率可以达到80％。松果菊苷对SW480细胞的24h半数抑制浓度(IC₅₀)为53.84±6.33μmol/L,48h半数抑制浓度(IC₅₀)为47.30±2.57μmol/L；松果菊苷对U2OS细胞的24h半数抑制浓度(IC₅₀)为36.24±4.42μmol/L,48h半数抑制浓度(IC₅₀)为25.7±3.86μmol/L。