[发明专利]一种制备培西加南的方法

说明书

本发明涉及多肽合成技术领域，特别涉及一种制备培西加南的方法。本发明的具体步骤为：A）通过液相法合成二肽片段Fmoc‑Lys(Boc)‑Lys(Boc)‑OH；B）采用固相合成法，以氨基树脂为起始树脂，按照培西加南主链肽序依次偶联具有N端Fmoc保护且侧链保护的氨基酸，其中7、8位，10、11位和21、22位氨基酸偶联采用二肽片段Fmoc‑Lys(Boc)‑Lys(Boc)‑OH偶联；C）肽树脂裂解，纯化，冻干后得到培西加南。本发明提供了一种合成效率高、成本低、同时还能避免两个赖氨酸偶联不完全产生的缺失肽杂质，适合规模化生产的培西加南的合成工艺。

技术领域

本发明涉及一种多肽类抗生素的制备方法，特别涉及一种制备培西加南的方法。

背景技术

培西加南，英名为：pexiganan，是含有22个氨基酸的线性多肽，肽序列为：

培西加南是葛兰素史克公司和Genaera公司(原Magainin Pharmaceuticals公司)联合开发的产品。它作为一种广谱的局用抗菌剂，用于治疗糖尿病足部溃疡的感染。培西加南最初是从爪蟾的腹部皮肤分离来的，为动物源的多肽类抗菌药物，是多肽类抗生素族magainin的一员，也是近20年来第2种新的抗生素族，能有效地对抗3000多种分离菌株，包括细菌(革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌和厌氧菌)、变形虫、真菌和寄生虫。培西加南作用机制不同于其它的抗生素，主要通过攻击微生物的细胞膜来杀菌，而大多数其它的抗生素则是使细菌关键蛋白失去功能。因此，有望成为新一代的抗菌剂。

由于爪蟾的正常细胞组织中含量有限，直接获得培西加南非常困难。CN200510014833和WO2011069280均报道了培西加南的基因工程的生产方法，采用基因工程技术制备抗菌肽，由于存在在于发酵表达量少，收率低，生产成本高的缺点，因此不利于工业化大生产。目前，多肽的合成主要还是运用固相多肽合成法制备，WO2011069280还报道了培西加南的类似物的多肽固相逐步偶联合成方法，此方法合成步骤较多，合成周期长，纯度和收率不高，特别在偶联两个赖氨酸时难以避免产生缺失肽杂质，因此也不适合规模化生产。

综上所述，现有培西加南的制备过程中，合成步骤较多，合成周期长，效率低，纯度和收率不高，特别在偶联两个赖氨酸时难以避免产生缺失肽杂质，不适合规模化生产。

发明内容

本发明人用现有的合成方法，制备培西加南，发现现有技术存在的技术问题是：合成步骤较多，合成周期长，效率低，纯度和收率不高，特别在偶联两个赖氨酸时难以避免产生缺失肽杂质，不适合规模化生产。为此，本发明人对培西加南的合成方法进行了研究，从而得到了本发明的技术方案。

本发明的目的是提供一种制备培西加南的方法。本发明的合成路线如图1所示：首先通过液相法合成二肽片段Fmoc-Lys(Boc)-Lys(Boc)-OH；其次采用固相合成法，以氨基树脂为起始树脂，按照培西加南主链肽序依次偶联具有N端Fmoc保护且侧链保护的氨基酸，其中7、8位，10、11位和21、22位氨基酸偶联采用二肽片段Fmoc-Lys(Boc)-Lys(Boc)-OH偶联；肽树脂裂解，纯化，冻干后得到培西加南。

本发明中一些常用的缩写具有以下含义；

Fmoc ：芴甲氧羰基

Fmoc-AA ：芴甲氧羰基保护的氨基酸

DIC ：N,N′-二异丙基碳化二亚胺

DCC ：N,N′-二环己基碳二亚胺

PyBOP ：六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷

HATU ：2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯

HOBt ：1- 羟基苯骈三唑