[发明专利]一种高特异性的利巴韦林人工抗原的制备方法

权利要求书

1.一种利巴韦林半抗原，其分子结构式如式Ⅱ所示

（式Ⅱ），

其是由利巴韦林为原料，在利巴韦林分子的5-号位羟基一端接出活性羧基，得到单一特异性结构的利巴韦林羧基衍生物，该衍生物为利巴韦林半抗原。

2.一种利巴韦林完全抗原，其特征在于：是权利要求1所述利巴韦林半抗原与载体蛋白的偶联物。

3.根据权利要求2所述的利巴韦林完全抗原，其特征在于：所述载体蛋白为牛血清白蛋白BSA、匙孔血蓝蛋白KLH、血蓝蛋白LPH、鸡卵清白蛋白OVA、人血清白蛋白HAS中的一种。

4.权利要求1所述的利巴韦林半抗原的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：100mg利巴韦林溶解于5mL无水DMF和5mL无水吡啶的混合液中，加入50mg琥珀酸酐后，60℃水浴反应12h，最后于pH为3，0℃条件下重结晶生成利巴韦林半抗原。

5.权利要求2所述的利巴韦林完全抗原的制备方法，其特征在于：将利巴韦林半抗原上的羧基与载体蛋白上的氨基进行偶联，得到利巴韦林完全抗原，步骤如下：

（1）将利巴韦林半抗原，用超纯水溶解，与NHS，EDC按摩尔比为1: 2: 2混合，在室温25℃下搅拌反应12h进行活化；取牛血清蛋白，利巴韦林半抗原与牛血清蛋白的摩尔比为80:1，用0.1M pH9.6 碳酸盐缓冲液溶解，其中溶解后的蛋白浓度大于3mg/mL；将活化的利巴韦林半抗原溶液慢速滴加到蛋白溶液中，室温下反应24h，用PBS缓冲液透析2天，期间换水4次，即得到利巴韦林完全抗原；

或（2）将利巴韦林半抗原，用超纯水溶解，0℃预冷30min，0℃下与三正丁胺, 氯甲酸异丁酯按摩尔比为1: 1.5: 1.5混合,  0℃反应1h进行活化；取牛血清蛋白，利巴韦林半抗原与牛血清蛋白的摩尔比为60:1，用 0.1M pH9.6 碳酸盐缓冲液溶解，0℃预冷30min，其中溶解后的蛋白浓度大于3mg/mL；在0℃条件下，将活化的利巴韦林半抗原溶液慢速滴加到蛋白溶液中，0℃条件下反应1h，然后室温下反应24h；用PBS缓冲液透析2天，期间换水4次，即得到利巴韦林完全抗原。

6.根据权利要求5所述方法，其特征在于：所述载体蛋白牛血清白蛋白BSA被替换为匙孔血蓝蛋白KLH、血蓝蛋白LPH、鸡卵清白蛋白OVA、人血清白蛋白HAS之一种。

7.权利要求2所述利巴韦林完全抗原的应用，其特征在于在制备利巴韦林抗体中的应用，免疫动物得到抗体。

8.根据权利要求7所述的利巴韦林完全抗原的应用，其特征在于：所述抗体为多克隆抗体和/或单克隆抗体。

9.权利要求8所述抗体在检测利巴韦林中的应用。