[发明专利]一种预测强直性脊柱炎易感性的试剂

说明书

技术领域

本发明涉及一种预测强直性脊柱炎易感性的试剂，更具体的说是通过测定与AS相关Chr6:g.31446930的多态性预测受试者对于强直性脊柱炎的易感性，该方法可用于疾病的辅助诊断、治疗和新药开发，属于生物技术领域。

背景技术

强直性脊柱炎(Ankylosing spondylitis，AS)是一种自身免疫性疾病，多发于16-40岁的青壮年，男女患病比例约为4～10:1。病变常首先发生于骶髂关节，少数重症患者表现为整个脊柱强直。此外，部分患者伴有不同程度的髋关节、眼、肺、心血管、肾等脊柱外病变。AS在白种人群中的发病率约为1％～3％，我国AS患病率约为0.2-0.6％，其中60％以上的患者伴有髋关节受累，致使20％以上AS患者残疾，炎症主要累及关节囊、肌腱和韧带的骨附着点，导致局部关节粘连强直，活动受限。临床上至今尚缺乏可明显缓解和控制疾病发展的药物。AS属多基因疾病，具有明显的遗传倾向，虽然通常认为遗传与免疫因素在AS发病中起主导作用，但确切的病因与发病机制仍不清楚。

目前进行AS遗传病因研究，多采用SNP作为基因组标志的关联分析方法，是有效的，已得到证明。SNP是指染色体基因组水平上单个核苷酸变异引起的DNA序列多态性，在人群中的频率需>1％，SNPs是双等位基因标记，这种单碱基变化中有70.1％为同型碱基之间的转换：如G/A或T/C，29.1％为发生在嘌呤和嘧啶之间的颠换。C(胞嘧啶)是人类基因组中最易发生变化的位点，因为大多数是甲基化胞嘧啶，能够自发脱氨基转换为T(胸腺嘧啶)，SNP包含了已知多态性的80-90％，是最常见的遗传变异。

由于生存的选择压力导致SNP在单一基因和整个基因组中的分布呈不均匀性。SNPs在基因非编码区的数量是编码区的4倍，总数可达3百万个。SNP以其密度高(平均每1kb就有1个)、代表性强(位于基因内部的SNP可能直接影响蛋白质结构或表达水平)、遗传稳定性好(同微卫星多态性比较而言)、易于自动化分析(因SNP在人群中多为双等位基因标记，可简单以“+/－或1/0”直接分型)等特点成为很好的遗传标志。

1973年，Brewerton等首先发现了与AS强相关的人类白细胞抗原-B27(HLA-B27)。随着研究的进展，与AS相关的其他易感基因如肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1(IL-1)陆续被识别。

Chr6:g.31446930位于6q21.3。该位点定位于人类白细胞抗原III区域，与免疫反应及自身性免疫疾病发生发展等密切相关。

Chr6:g.31446930与AS相关联的研究近些年尚无报道。

发明内容

本发明的主要目的是提供一种预测强直性脊柱炎易感性的试剂。

本发明的第二个目的是提供一种检测强直性脊柱炎易感性基因的方法。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种检测强直性脊柱炎易感性的核酸序列，具有序列表SEQ ID No.1所示的碱基序列，其Chr6:g.31446930位置即是变异位点，以字母“M”(确认M＝C或A)标示出。该核酸序列为Chr6:g.31446930附近部分序列。图1为Chr6:g.31446930多态性变异位点的示意图，附图中包含有2个基因，Chr6:g.31446930标在2个基因中间的相应位置。

一种检测强直性脊柱炎易感性的方法，通过提取宿主细胞的基因组DNA，测定受试者的Chr6:g.31446930位置多态性位点的基因型，预测受试者对强直性脊柱炎的易感性：Chr6:g.31446930位置多态性位点的基因型为CC时，受试者的易感性最低；携带A等位基因时，受试者的易感性升高。

一组检测强直性脊柱炎易感性的引物，引物的核苷酸序列分别为序列表SEQ IDNo.2和序列表SEQ ID No.3所示，长度分别为25bp和25bp，而且可以特异性地扩增出包含有SEQ ID No.1所示序列中Chr6:g.31446930位置的产物。

本发明提供了一种检测强直性脊柱炎易感性的诊断试剂盒，其中含有本发明特异性扩增Chr6:g.314469302位点的引物对和用于PCR扩增检测的试剂盒的常规组件、试剂、缓冲液等，本领域技术人员熟知这些常规组件和检测方法。本发明试剂盒中的全部组分、含量、来源和使用方法如下：

一种检测强直性脊柱炎易感基因的试剂盒，由以下试剂组成：

(1)10μL 10×PCR缓冲液；

(2)2μL 10mMdNTP混合液；