[发明专利]水貂犬瘟热-细小病毒性肠炎二联活疫苗及其制备方法和用途

说明书

技术领域

本发明涉及一种二联活疫苗及其制备方法和用途，特别涉及一种水貂犬瘟热-细小病毒性肠炎二联活疫苗及其制备方法和用途，本发明属于兽医生物制品技术领域。

背景技术

犬瘟热是由副黏病毒科麻疹病毒属犬瘟热病毒引起的急性、热性、高度接触性传染病，其主要特征是以侵害黏膜系统为主，出现双相体温升高，伴有卡他性肺炎、胃肠炎，偶有神经症状，容易继发其他细菌病毒的混合感染和二次感染，死亡率可高达80％。带毒动物是最危险的传染源，通过眼及鼻分泌物、唾液、尿、粪便排出病毒，主要经消化道、呼吸道传染，是水貂养殖业三大疫病之一，俗称“貂瘟”。

水貂细小病毒性肠炎是由细小病毒科细小病毒属水貂细小病毒引起的急性、高度接触性传染病，是水貂养殖业三大疫病之一。不同年龄和品种的水貂均有易感性，但50～60日龄的仔貂和幼貂最为易感，幼貂的发病率为70％以上，其死亡率可达90％；成年貂的发病率为30％左右，死亡率在30％以下。患病水貂和耐过貂是该病的主要传染源，通过粪、尿、唾液排毒，经消化道和呼吸道传染给易感染的健康貂。该病全年都可发生，常呈地方性流行，一旦传入貂场，如兽医防疫卫生措施不完善，常常导致该病长期存在和周期性发生。

我国毛皮动物养殖业从上世纪50年代起步，90年代获得蓬勃发展，现金已成为畜牧业养殖的重要组成部分。目前，我国水貂存栏数可达5000万只，主要集中在山东、河北、吉林、辽宁、黑龙江等省份地区，并形成了较大的产业链。在某些地区水貂等毛皮动物养殖业甚至成为区域经济的支柱性产业。可见毛皮动物养殖业对推动“三农”经济发展，促进农村产业结构调整，增加农民就业和收入起到了重要的作用。水貂犬瘟热和细小病毒性肠炎是危害水貂养殖业的两种最重要传染病，由于缺乏特效的治疗方法，目前仍以疫苗接种作为两种疫病的主要防控手段。

目前国内市场上流行的水貂犬瘟热和细小病毒性肠炎疫苗多为未冻干的单疫苗，往往需要对水貂进行两次或两次以上的免疫，既提高了养殖成本，加大养殖户的工作量，又对兽群造成严重的应激反应，甚至导致各别水貂的猝死。同时湿苗还具有保存期短，不易运输和储存等缺点。因此，研制出安全、有效、保存期长、容易储存运输的水貂犬瘟热-细小病毒性肠炎二联活疫苗是控制水貂犬瘟热和细小病毒性肠炎的有效方法，实现“一针防两病”，是行业和市场的迫切需求，具有广阔的市场前景。

发明内容

为解决上述问题，本发明的目的在于提供一种水貂犬瘟热、细小病毒性肠炎二联活疫苗及其制备方法，本发明的二联活疫苗可用于同时预防水貂犬瘟热、细小病毒性肠炎两种疾病。

为了达到上述目的，本发明采用的技术手段为：

本发明的一种水貂犬瘟热-细小病毒性肠炎二联活疫苗，其特征在于有效成分包括水貂细小病毒弱毒疫苗株MEVB-F61以及水貂犬瘟热病毒弱毒疫苗株CDV3-CL，其中所述的水貂细小病毒弱毒疫苗株MEVB-F61保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为：CGMCC NO.9560。

其中，所述的水貂细小病毒弱毒疫苗株MEVB-F61为本发明发明人自行经过在猫肾细胞CRFK上多次传代后获得的弱毒疫苗株，命名为MEVB-F61，分类命名为水貂细小病毒(Mink Enteritis Virus)，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址在北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏号为：CGMCC NO.9560，保藏时间为：2014年8月13日。

所述的水貂犬瘟热病毒弱毒疫苗株CDV3-CL为市售且已进行新兽药注册的弱毒疫苗株，该疫苗株由本单位(中国农业科学院特产研究所)分离、克隆纯化并鉴定。

在本发明中，优选的，所述的水貂犬瘟热-细小病毒性肠炎二联活疫苗成品中犬瘟热病毒滴度(TCID₅₀)≥10^4.0/头份，水貂细小病毒滴度(TCID₅₀)≥10^5.5/头份。

本发明还提供了一种制备以上所述的水貂犬瘟热-细小病毒性肠炎二联活疫苗的方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)将所述的水貂细小病毒弱毒株MEVB-F61接种在猫肾细胞F81或CRFK上进行病毒扩增培养，每日观察细胞病毒情况，待细胞病变达到80％左右时即可通过反复冻融的方法收获病毒液，并进行病毒滴度(TCID₅₀≥10^6.5)、纯净性检验，将检验合格的病毒液保存于-20℃；