[发明专利]一种同时检测猪肺炎支原体、猪多杀性巴氏杆菌的二重PCR方法在审
| 申请号： | 201410578806.9 | 申请日： | 2014-10-24 |
| 公开（公告）号： | CN104313154A | 公开（公告）日： | 2015-01-28 |
| 发明（设计）人： | 朱建国;韩少鹏 | 申请（专利权）人： | 上海交通大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12Q1/04;C12R1/35;C12R1/01 |
| 代理公司： | 上海新天专利代理有限公司 31213 | 代理人： | 张宁展 |
| 地址： | 200240 *** | 国省代码： | 上海;31 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 同时 检测 肺炎 支原体 猪多杀性巴氏 杆菌 二重 pcr 方法 | ||
1.一种同时检测猪肺炎支原体、猪多杀性巴氏杆菌的二重PCR方法，其特征在于，具体步骤如下：
(1)首先筛选出猪肺炎支原体、猪多杀性巴氏杆菌的保守性基因片断作为PCR检测靶点，合成扩增这些靶点基因的引物；
(2)将2对引物置于一个PCR反应体系中，扩增猪肺炎支原体、猪多杀性巴氏杆菌的保守性基因片断；
(3)通过琼脂糖凝胶电泳检测鉴定PCR扩增产物；其中：
扩增猪肺炎支原体目的片段的上游引物的序列如SEQ ID NO.1所示；下游引物的序列如SEQ ID NO.2所示；
扩增猪多杀性巴氏杆菌目的片段的上游引物的序列如SEQ ID NO.3所示；下游引物的序列如SEQ ID NO.4所示。
2.根据权利要求1所述的二重PCR方法，其特征在于，步骤(1)中，猪肺炎支原体的保守型基因片段为Sp36基因，猪多杀性巴氏杆菌的保守性基因片段为KMT基因。
3.根据权利要求1所述的二重PCR方法，其特征在于，步骤(2)中，所述PCR反应体系如下：cDNA模板1μl，2对上、下游引物各0.5μl，PCR Mix 12.5μl，超纯水补充至25μl；PCR反应条件：95℃预变性5min，进入95℃60s，58℃1min和72℃1min的循环，循环35次，最后72℃延伸5min。
4.根据权利要求1所述的二重PCR方法，其特征在于，对实际待检测样品前处理时，选择适宜猪多杀性巴氏杆菌、猪肺炎支原体的TSB培养基，将现场采到组织样品直接放在TSB液体培养基中培养12h后，取菌液提取猪被检病原体DNA样品，作为模板进行二重PCR检测。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于上海交通大学，未经上海交通大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201410578806.9/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
