[发明专利]焦磷酸测序法同时检测API2-MALT1和NPM-ALK融合基因的引物对及试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学领域，具体涉及一种焦磷酸测序法同时检测API2-MALT1和NPM-ALK融合基因的引物对，包含所述引物对的试剂盒及该试盒剂的应用。 

背景技术

API2-MALT1融合基因包括API2-MALT1(A1446-M814)、API2-MALT1(A1446-M1123)、API2-MALT1(A1446-M1150)等多种类型，常见于黏膜相关淋巴组织(MALT)淋巴瘤中；NPM-ALK融合基因常见于间变性大细胞淋巴瘤(ALCL)中。 

当前国内外广泛使用的分子生物学检测API2-MALT1和NPM-ALK融合基因的方法中，荧光原位杂交技术(FISH)只能进行定性检测、操作复杂；荧光定量PCR存在着检测通量的局限性，所以都还不能真正满足临床诊断检测的需要。传统的固相生物芯片(Biochip)或基因芯片技术存在着可重复性差、灵敏度不够好以及操作繁琐的突出弱点。 

焦磷酸测序技术(Pyrosequencing)是新一代DNA序列分析技术，具备同时对大量样品进行测序分析的能力，为高通量、低成本、快速、直观地进行核苷酸分析和临床检验提供了非常理想的技术操作平台。 

发明内容

发明目的：针对现有技术中存在的技术问题，本发明提出一种焦磷酸测序法同时检测API2-MALT1和NPM-ALK融合基因的引入对以及含有所述引物对的试剂盒，可以同时检测API2-MALT1(A1446-M814)、API2-MALT1(A1446-M1123)、API2-MALT1(A1446-M1150)和NPM-ALK多种融合基因，具有高灵敏度、高特异性、高准确度、检测迅速等优点。 

技术方案：为实现上述技术目的，本发明提出了一种焦磷酸测序法同时检测API2-MALT1和NPM-ALK融合基因的引物对，所述的API2-MALT1为API2-MALT1(A1446-M814)、API2-MALT1(A1446-M1123)、API2-MALT1(A1446-M1150)中的任意一种或几种，其特征在于，所述引物对包括： 

(1)对于API2-MALT1(A1446-M814)基因： 

扩增引物为： 

上游引物：5′-GAAGCCTGGTAAAACAGACAGTTC-3′， 

下游引物：5′-CATCAGCTTTTGGGAAGTTGGT-3′， 

其中下游引物的5′端进行生物素标记； 

测序引物为： 

5′-CAACACTTCTCTGGAAGC-3′； 

(2)对于API2-MALT1(A1446-M1123)基因： 

扩增引物为： 

上游引物：5′-GAAGCCTGGTAAAACAGACAGTTC-3′， 

下游引物：5′-TTTCCTATCAAAAGGGCAACC-3′， 

其中下游引物的5′端进行生物素标记； 

测序引物为： 

5′-TGAGGAAAAAGAATCA-3′； 

(3)对于API2-MALT1(A1446-M1150)基因： 

扩增引物为： 

上游引物：5′-CAGAAGATGAAATAAGGGAAGAGG-3′， 

下游引物：5′-TATTTCCTATCAAAAGGGCAACC-3′， 

其中下游引物的5′端进行生物素标记； 

测序引物为： 

5′-GTCAGTTGTTTGCTCTTTA-3′； 

(4)对于NPM-ALK基因： 

扩增引物为： 

上游引物：5′-CAAAGTGAGATTACAGGCATGAGC-3′， 

下游引物：5′-GCTGGGATCTTGGTCAGTTGTGT-3′， 

其中下游引物的5′端进行生物素标记； 

测序引物： 

5′-GGTCAGTTGTGTTTCCTAT-3′。 

本发明进一步提出了一种焦磷酸测序法同时检测API2-MALT1和 NPM-ALK融合基因的试剂盒，所述的API2-MALT1为API2-MALT1(A1446-M814)、API2-MALT1(A1446-M1123)和API2-MALT1(A1446-M1150)中的任意一种或几种，其特征在于，所述试剂盒包含质控品和如下引物：