[发明专利]一种PCR反应液及试剂盒和PCR方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种PCR反应液及试剂盒和PCR方法。

背景技术

聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction，PCR)是一种体外快速扩增特定DNA片段的技术，它是现代分子生物学最重要的手段之一。其基本原理是根据获诺贝尔1953年生理学奖的DNA双螺旋模型所建立的体细胞复制的机制以及双链DNA在体外可随温度变化发生变性与复性的特点设计。1985年Randll.K.Skaii等利用Klenow DNA聚合酶建立了聚合酶链式反应技术，并将其应用于镰刀形贫血病的基因诊断。它是80年代分子生物学领域的一项革命性突破，被誉为分子生物学资源发展史上的又一里程碑。此项技术一经问世就因其操作简单、快速、灵敏度高和特异性强等优点迅速在与分子生物学相关的学科得到广泛应用，如分子生物学研究、医学检验、动植物检验、法医鉴定及考古等各个领域。

在PCR过程中，DNA聚合酶起着关键性作用。目前已有100多个DNA聚合酶的相关基因被克隆和测序，Thermus aquaticus是一种水生嗜热菌，从该菌中分离出的DNA聚合酶(Taq DNA聚合酶)具有催化以DNA为模板合成DNA的功能。

Taq NDA聚合酶是Mg²⁺依赖性酶，该酶的催化活性对Mg²⁺浓度非常敏感。研究表明，Mg²⁺浓度低于lmM，dNTP过多，鳌合Mg²⁺作用强时，Mg²⁺对Taq DNA聚合酶的催化作用几乎丧失，不产生扩增产物。随着Mg²⁺浓度的增加，其催化作用增强，扩增产物增多，但产物浓度增大的同时，背景也明显增强。

常规的PCR扩增体系配置，往往是将DNTP、Buffer、rTaq酶等试剂单独保存，待要进行PCR扩增时，将样品分别加到同一PCR管中，在操作过程中除了经常忘记加入个别试剂的缺点外，多次的取用会对试剂造成污染，影响后续使用。因此，急需研发一种PCR扩增体系对于减少PCR扩增体系配置时间以及提高PCR体系配置的准确性和减少PCR扩增过程中的污染。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是：提供一种减少PCR反应液配置时间的含有溴酚蓝指示剂的PCR反应液的配置方法。

为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：提供一种PCR反应液，包括如下的原料制备而成：二甲亚砜，牛血清蛋白，DNTP，10×PCR buffer，溴酚蓝溶液，溶质体积百分数为30％的甘油溶液和rTaq酶。

本发明的另一技术方案为提供一种PCR试剂盒，其包含上述的PCR反应液。

本发明的又一技术方案为提供一种PCR方法，包含使用上述的PCR反应液的步骤。

本发明的有益效果在于：本发明优化了PCR实验的PCR反应液，特别是加入一定比例的甘油溶液，以保证rTaq酶的活性，加入BSA与DMSO的组合保证了Tag酶的稳定性及活性，并减少引物二聚体的形成，减少PCR反应液配置时间，在琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物时，只需加入核酸染料即可检测，与常规的PCR检测相比，使用本发明PCR反应液无需再加入溴酚蓝指示剂，可以大量节省PCR产品检测时间，提高PCR的扩增效率，适用于大批量PCR产品的检测。

附图说明

图1为本发明具体实施方式中的转基因水稻GUS基因结果检测图；

其中泳道1，2是常规PCR方法配置的PCR检测结果，泳道3、4是含有溴酚蓝指示剂的PCR反应液的PCR检测结果，泳道5是DNA marker。

具体实施方式

为详细说明本发明的技术内容、所实现目的及效果，以下结合实施方式并配合附图予以说明。

本发明最关键的构思在于：本发明在PCR反应液中加入甘油、BSA与DMSO有保证Tag酶的稳定性及活性，制备出可以直接使用的PCR混合液提高PCR的扩增效率。

实施例1

一种PCR反应液，包括如下原料制备而成：6-8μl二甲亚砜，6-8μl质量体积百分数为0.1％的牛血清蛋白溶液，9-11μl 10mM DNTP溶液，18-22μl 10×PCRbuffer，2-4μl溴酚蓝溶液，45-55μl溶质体积百分数为30％甘油溶液和4-6μl rTaq酶。