[发明专利]日本血吸虫雌虫发育调控关键核糖体蛋白的鉴定方法

权利要求书

1.一种日本血吸虫雌虫发育调控关键核糖体蛋白的鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)用血吸虫尾蚴感染小鼠：包括单螺释放的血吸虫单性尾蚴进行的单性感染与多螺释放的混合尾蚴进行的双性感染两种方式；

(2)对感染后的小鼠在SPF级动物房饲养，饲养包括两个阶段四个时期，即单性感染18天和23天以及双性感染18天和23天；

(3)收集培养后小鼠体内的日本血吸虫：若单只小鼠仅获得雌虫，作为单性雌虫样本，若单只小鼠获得两性虫体，分离雌虫，作为双性雌虫样本；

(4)将步骤(3)所得雌虫转移到Trizol试剂中，做solexa分析：分别分析不同雌虫样本基因表达谱，分析和比较不同样本核糖体基因表达差异；

(5)将步骤(3)所得雌虫保存在生理盐水中，做iTRAQ分析：分别分析不同雌虫样本核糖体蛋白表达谱，分析和比较不同样本核糖体蛋白表达差异；

(6)通过对比不同发育阶段核糖体蛋白表达谱和基因表达谱，得到雌虫在不同发育阶段，核糖体蛋白在蛋白和基因两个水平的表达特点。

2.根据权利要求1所述的一种日本血吸虫雌虫发育调控关键核糖体蛋白的鉴定方法，其特征在于，在步骤(4)做solexa分析后，用Real-time PCR方法验证solexa技术分析质量。

3.根据权利要求1所述的一种日本血吸虫雌虫发育调控关键核糖体蛋白的鉴定方法，其特征在于，在步骤(5)做iTRAQ分析后，对其中高表达的蛋白进行Western blot验证。

4.根据权利要求1所述的一种日本血吸虫雌虫发育调控关键核糖体蛋白的鉴定方法，其特征在于，步骤(1)中对小鼠进行感染时，利用单螺释放单性尾蚴的特点，按一螺释放的尾蚴感染一只小鼠，或者用不同螺释放的尾蚴组合后感染小鼠。

5.根据权利要求1所述的一种日本血吸虫雌虫发育调控关键核糖体蛋白的鉴定方法，其特征在于，对感染后的小鼠在SPF级动物房饲养18天时，血吸虫为合抱前未发育的状态，培养至23天时，为合抱后性成熟的状态，取这两个时间点的小鼠进行分析。

6.根据权利要求1所述的一种日本血吸虫雌虫发育调控关键核糖体蛋白的鉴定方法，其特征在于，收集培养后小鼠体内的日本血吸虫的方法为：用无菌预冷生理盐水从小鼠主动脉灌注，冲出血吸虫，然后将血吸虫在无菌生理盐水中洗3次。

7.根据权利要求1所述的一种日本血吸虫雌虫发育调控关键核糖体蛋白的鉴定方法，其特征在于，做solexa分析之前，在解剖镜下，用注射器针头挑取并转移新鲜雌虫到含有1000ul Trizol试剂的EPP管中，-80℃保存备用，或者直接匀浆取RNA。

8.根据权利要求1所述的一种日本血吸虫雌虫发育调控关键核糖体蛋白的鉴定方法，其特征在于，做iTRAQ分析之前，在解剖镜下，用注射器针头挑取并转移新鲜雌虫到含有1000ul生理盐水的EPP管中，液氮中保存备用。