[发明专利]长链非编码RNA LOC401317原位杂交探针的应用方法

说明书

技术领域

本发明属于肿瘤分子生物学领域，具体涉及长链非编码RNA LOC401317的原位杂交探针的应用方法。 

背景技术

口腔颌面部恶性肿瘤是常见高发的头颈部恶性肿瘤，容易发生颈部淋巴结转移，预后较差。研究表明，这种肿瘤的发生发展是多基因参与、多步骤、多阶段的复杂过程，其中抑癌基因的失活与癌基因的激活发挥了关键的作用。 

长链非编码RNAs(long non-coding RNAs,lncRNAs)是一类长度超过200nt、缺少特异完整的开放阅读框、无或很少有蛋白编码功能的RNAs分子。最近的研究表明，lncRNAs通过在表观遗传、转录和转录后水平广泛调节基因的表达，它们参与了生物体生长、发育、衰老及死亡等重要生命活动的调控。越来越多的研究表明lncRNAs的异常表达或功能缺失与肿瘤的发生发展密切相关。一些lncRNAs分子在肿瘤的诊断和治疗方面具有重要的意义，且可以作为肿瘤预后判断新的分子标记。目前，已经克隆的人类lncRNAs基因已超过4万多个，但绝大部分lncRNA的功能未知。 

我们检测了LOC401317在临床离体肿瘤样本中的表达水平，并分析了LOC401317表达水平与临床病例资料的相关性。我们从口腔肿瘤及相对应的正常对照组织中抽提RNA后通过逆转录，实时定量PCR，检测了LOC401317的表达情况，结果显示LOC401317在口腔肿瘤组织中表达下调。我们随后又利用原位杂交的方法，进一步在存档石蜡样本验证了LOC401317在口腔肿瘤中表达显著下调，因此针对LOC401317的检测制剂可用于口腔肿瘤的辅助诊断，结合临床回访资料进行生存曲线分析发现LOC401317表达低的患者其生存时间短于该lncRNA表达高的患者，因此针对该lncRNA的检测制剂也可以用于口腔肿瘤的预后判断。 

发明内容

本发明的目的是提供lncRNA LOC401317的原位杂交探针的应用方法，利用LOC401317 序列得到的原位杂交探针可以制备用于口腔肿瘤辅助诊断或者预后预测的制剂。 

长链非编码RNA LOC401317原位杂交探针的应用方法，用于制备口腔肿瘤辅助诊断或者疗效预测的原位杂交检测制剂，该长链非编码RNA LOC401317的序列见SEQ NO:1；原位杂交检测LOC401317表达的探针序列如下： 

LOC401317探针1：5’-TTAAAAATAAATCTATGGCAAAGAAGAAGCGGGA-3’ 

LOC401317探针2：5’-AAGGAGGGAAAAATAAAAATCAAACACATTCTGC-3’。 

所述的原位杂交检测试剂为试剂盒。 

试剂盒中含有 

检测LOC401317表达的探针： 

LOC401317探针1：5’-TTAAAAATAAATCTATGGCAAAGAAGAAGCGGGA-3’ 

LOC401317探针2：5’-AAGGAGGGAAAAATAAAAATCAAACACATTCTGC-3’。 

阳性对照探针(用于检测看家基因GAPDH的表达) 

GAPDH探针1：5'-CCACTTTACCAGAGTTAAAAGCAGCCCTGG-3' 

GAPDH探针2：5'-GTCAGAGGAGACCACCTGGTGCTCAGTGTA-3'。 

试剂盒中还含有：地高辛寡核苷酸加尾试剂、抗地高辛-辣根过氧化物酶复合物检测试剂、DAB染色试剂；