[发明专利]一种超声处理促肝细胞生长素的制备方法在审
| 申请号： | 201410583530.3 | 申请日： | 2014-10-27 |
| 公开（公告）号： | CN104388509A | 公开（公告）日： | 2015-03-04 |
| 发明（设计）人： | 王康林;马婕;苟希霞 | 申请（专利权）人： | 合肥平光制药有限公司 |
| 主分类号： | C12P21/06 | 分类号： | C12P21/06;C07K1/34 |
| 代理公司： | 合肥市长远专利代理事务所(普通合伙) 34119 | 代理人： | 程笃庆;黄乐瑜 |
| 地址： | 231131 安徽省合肥*** | 国省代码： | 安徽;34 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 超声 处理 肝细胞 生长素 制备 方法 | ||
1.一种超声处理促肝细胞生长素的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1、乳猪肝预处理：取乳猪肝，去除胆囊、筋膜和结缔组织，清水洗净，沥水后再用注射用水清洗，然后切成宽度为3-5cm的小块或细条状，再置于绞肉机中绞成粒径为1-3mm的乳猪肝颗粒；
S2、均质：将S1得到的乳猪肝颗粒加入胶体磨中以3000-3200rpm的转速研磨2-3min得到乳猪肝糜，将乳猪肝糜和注射用水按重量比为7-9:7-9加入搅拌机中，以300-320rpm的转速搅拌13-16min得到乳猪肝匀浆；
S3、超声处理：将S2得到的乳猪肝匀浆置于超声波处理机内利用超声波在冰浴中处理得到超声匀浆，超声波功率为500-550W，超声波频率为45-50kHz，超声波处理时间为60-80s；
S4、酶解：将S3得到的超声匀浆置于反应容器中，滴加2-4mol/L盐酸溶液至pH值为2.5-3.5，再加入胃蛋白酶以170-210rpm的转速搅拌35-38min后，将反应容器及其内容物置于40-45℃的水浴锅中水解6-7h得到酶解物料，其中乳猪肝匀浆与胃蛋白酶的重量比为99-101:0.7-0.8；
S5、灭活：将S4得到的酶解物料水浴加热至81-82℃，保温12-15min后，将温度降至室温静置得到灭活匀浆；
S6、离心：将S5得到的灭活匀浆加入离心瓶中，以4200-4500rpm的转速离心11-14min后，将上清液取出滴加2-4mol/L氢氧化钠溶液至pH为6.8-7.2得到中性离心液；
S7、粗滤：将S6得到的中性离心液经过截留分子量为100KD的中空纤维超滤装置进行第一次过滤后，再经过截留分子量为10KD的中空纤维超滤装置进行第二次过滤得到粗滤液，其中第一次过滤和第二次过滤的回流压力为0.03-0.06MPa；
S8、超滤：将S7得到的粗滤液再经截流分子量为6000D的超滤膜进行超滤得到促肝细胞生长素溶液，其中进液压力为0.13-0.16MPa，回流压力为0.03-0.06MPa。
2.根据权利要求1所述超声处理促肝细胞生长素的制备方法，其特征在于，S3中，将S2得到的乳猪肝匀浆置于超声波处理机内利用超声波在冰浴中处理得到超声匀浆，超声波功率为520-540W，超声波频率为47-48kHz，超声波处理时间为65-75s。
3.根据权利要求1或2所述超声处理促肝细胞生长素的制备方法，其特征在于，S4中，将S3得到的超声匀浆置于反应容器中，滴加2.6-3mol/L盐酸溶液至pH值为2.8-3.2，再加入胃蛋白酶以180-200rpm的转速搅拌36-37min后，将反应容器及其内容物置于42-44℃的水浴锅中水解6.3-6.7h得到酶解物料，其中乳猪肝匀浆与胃蛋白酶的重量比为99.7-100:0.72-0.75。
4.根据权利要求1-3任一项所述超声处理促肝细胞生长素的制备方法，其特征在于，S6中，将S5得到的灭活匀浆加入离心瓶中，以4300-4400rpm的转速离心12-13min后，将上清液取出滴加2.5-3.5mol/L氢氧化钠溶液至pH为6.9-7得到中性离心液。
5.根据权利要求1-4任一项所述超声处理促肝细胞生长素的制备方法，其特征在于，S8中，将S7得到的粗滤液再经截流分子量为6000D的超滤膜进行超滤得到促肝细胞生长素溶液，其中进液压力为0.14-0.15MPa，回流压力为0.04-0.05MPa。
6.根据权利要求1-5任一项所述超声处理促肝细胞生长素的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1、乳猪肝预处理：取乳猪肝，去除胆囊、筋膜和结缔组织，清水洗净， 沥水后再用注射用水清洗，然后切成宽度为3-5cm的小块或细条状，再置于绞肉机中绞成粒径为1-3mm的乳猪肝颗粒；
S2、均质：将S1得到的乳猪肝颗粒加入胶体磨中以3100rpm的转速研磨2.5min得到乳猪肝糜，将乳猪肝糜和注射用水按重量比为1:1加入搅拌机中，以310rpm的转速搅拌14min得到乳猪肝匀浆；
S3、超声处理：将S2得到的乳猪肝匀浆置于超声波处理机内利用超声波在冰浴中处理得到超声匀浆，超声波功率为520W，超声波频率为48kHz，超声波处理时间为75s；
S4、酶解：将S3得到的超声匀浆置于反应容器中，滴加3mol/L盐酸溶液至pH值为3.2，再加入胃蛋白酶以200rpm的转速搅拌36min后，将反应容器及其内容物置于42℃的水浴锅中水解6.7h得到酶解物料，其中乳猪肝匀浆与胃蛋白酶的重量比为100:0.75；
S5、灭活：将S4得到的酶解物料水浴加热至81.5℃，保温14min后，将温度降至室温静置得到灭活匀浆；
S6、离心：将S5得到的灭活匀浆加入离心瓶中，以4400rpm的转速离心13min后，将上清液取出滴加3.5mol/L氢氧化钠溶液至pH为7得到中性离心液；
S7、粗滤：将S6得到的中性离心液经过截留分子量为100KD的中空纤维超滤装置进行第一次过滤后，再经过截留分子量为10KD的中空纤维超滤装置进行第二次过滤得到粗滤液，其中第一次过滤和第二次过滤的回流压力为0.05MPa；
S8、超滤：将S7得到的粗滤液再经截流分子量为6000D的超滤膜进行超滤得到促肝细胞生长素溶液，其中进液压力为0.15MPa，回流压力为0.05MPa。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于合肥平光制药有限公司，未经合肥平光制药有限公司许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201410583530.3/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
- 上一篇：一种促肝细胞生长素的制备方法
- 下一篇：一种高纯度米力农的制备方法
