[发明专利]一株高产DHA裂殖壶菌菌株及其培养方法与应用

权利要求书

1.一株裂殖壶菌(Schizochytrium sp.)BLCY-01，2014年07月15日保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCC No：9461。

2.权利要求1所述裂殖壶菌(Schizochytrium sp.)BLCY-01的培养方法，其特征在于，步骤如下：

(1)将裂殖壶菌(Schizochytrium sp.)BLCY-01接种于活化培养基中，20～30℃活化培养24～48h，制得活化菌株；

(2)取步骤(1)制得的活化菌株，接种于种子液体培养基中，在20～30℃、200～240r/min条件下，培养24～48h，制得裂殖壶菌(Schizochytrium sp.)BLCY-01菌液。

3.如权利要求2所述的培养方法，其特征在于，所述活化培养基每升组分如下：

葡萄糖30g，蛋白胨10g，酵母浸粉5g，海水晶15g，水定容至1L，pH自然。

4.如权利要求2所述的培养方法，其特征在于，所述种子液体培养基每升组分如下：

葡萄糖30，蛋白胨10，酵母浸粉5，海水晶15，磷酸氢二钾1.5，无水硫酸镁0.5，大豆油0.3，水定容至1L，pH自然。

5.权利要求1所述裂殖壶菌(Schizochytrium sp.)BLCY-01在制备DHA中的应用。

6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，步骤如下：

I、取上述制备的裂殖壶菌(Schizochytrium sp.)BLCY-01菌液，按体积百分比5～10％接种于液体发酵培养基中，在温度25～28℃、通气量0.3～0.5vvm、pH5.0～7.0的条件下，搅拌发酵40～50h，流加碳源溶液和氮源溶液，使发酵罐中的碳源浓度为10～20g/L，氮源浓度为0.8～1.2g/L，然后在温度20～25℃、通气量0.3～0.5vvm的条件下，继续发酵培养6～24h，制得发酵液；

所述的液体发酵培养基每升组分如下：

碳源30～90g、氮源1～10g、海水晶15～50g，水定容至1L，pH为4.5～7.5；

II、取步骤I制得的发酵液，经固液分离，取沉淀，经菌体破碎、DHA提取、纯化，制得DHA。

7.如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述步骤I中的搅拌速度为180～220rpm；优选的，所述步骤I中继续发酵培养的搅拌速度为100～150rpm。

8.如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述步骤I中流加碳源溶液的质量浓度为50g/L。

9.如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述步骤I中流加氮源溶液的质量浓度为3g/L。

10.如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述步骤I中碳源选自：葡萄糖、甘油或果糖；氮源选自：蛋白胨、酵母浸粉、玉米浆粉、豆粕粉、硝酸钠或硫酸铵。