[发明专利]一种利用微藻为原料生产2;3-丁二醇的方法

权利要求书

1.一种利用微藻为原料生产2,3-丁二醇的方法，包括如下内容：

（1）微藻培养：将微藻种子液接入富含N元素的微藻培养基中，培养到对数生长期停止；静置沉降后排出上清液，添加含微量N元素的微藻培养基和适量3-磷酸甘油酸继续培养，培养至稳定期获得微藻培养液；所述的富含N元素的微藻培养基是指在常规微藻培养基中加入无机氮，加入量为2.0-5.0g/L；所述的含微量N元素的微藻培养基是指降低常规微藻培养基中氮源的含量，加入量为0-0.5g/L；所述的富含N元素的微藻培养基中加入的无机氮为NaNO₃、NH₄NO₃或NH₄Cl；所述的微藻选用小球藻(Chlorella vulgaris)、莱茵衣藻(Chlamydomonas reinhardtii)、四尾珊藻(Scenedesmus quadricanda)中的一种或几种；所述的3-磷酸甘油酸的加入量为0.005-0.05g/L；

（2）水解处理：在上述微藻培养液中加入蜗牛酶进行破壁处理，随后按照最终水解体系中酸浓度为0.5wt%-5.0wt%加入无机强酸，升温至100-150℃进行水解，获得微藻水解液；

（3）发酵培养：以得到的微藻水解液为碳源制备发酵培养基，并采用克雷伯氏菌(Klebsiella pneumonia)CICC10011发酵生产2,3-丁二醇。

2.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（1）所述的微藻培养基采用SE、TAP或BG11培养基。

3.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（1）所述的微藻种子液是指将微藻接入培养基后培养至对数生长期获得的藻液，微藻培养时控制微藻种子液的接种量为2v%-10v%。

4.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（1）所述的微藻种子液和微藻培养的具体条件如下：温度25-30℃，通气量0.1-1.0vvm，CO₂含量为1v%-3v%，搅拌转速50-200rpm，pH 6.0-8.0，光暗比10:14 -14:10。

5.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（1）采用以下两步培养方式：在富含N元素的微藻培养基中培养时，通入的CO₂含量为1v%-3v%，光暗比为10:14-14:10，培养到对数生长期停止；静置沉降后排出上清液，同时将CO₂的含量提高到3v%-5v%，pH调节为8.0-9.0，光暗比为18:6-24:0，培养至稳定期。

6.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（2）按照5-50mg/g藻液加入蜗牛酶对细胞进行破壁处理，控制破壁处理的pH 5.0-8.0，温度为30-45℃。

7.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（2）按照最终水解体系中酸浓度为1.0wt%-2.5wt%加入无机强酸，升温至100-120℃，保温10-60min。