[发明专利]用于饲喂黄粉虫的益生联菌固态发酵剂及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及用于饲喂黄粉虫的益生联菌固态发酵剂及其制备方法。

背景技术

近年来抗生素滥用引起了社会广发关注，研发抗生素替代品刻不容缓(Chen Y and Schwack W,2014)。益生菌被认为是抗生素理想的替代品。所谓益生菌，是定植于人体肠道、生殖系统内，能产生确切健康功效从而改善宿主微生态平衡、发挥有益作用的活性有益微生物的总称(Sylvia H et al.,2013.)。双歧杆菌(Bifidobacterium bifidum)是定植于人和动物肠道内的一类重要生理细菌，对人和动物机体发挥着生物屏障、营养、免疫、抗肿瘤、改善代谢等多种生理作用；丁酸梭菌(Clostridium butyricum)可抑制肠道有害菌，促进有益菌生长，减少肠内氨、胺含量，产生如维生素K等多种维生素；地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，能产生几丁质酶、葡聚糖酶、抗菌肽等蛋白以及一些次级代谢产物。益生菌发酵物的优劣与发酵所使用的微生物菌种及发酵工艺息息相关。相对于纯培养，联菌培养更有利于提高活菌数及达到益生效果。

黄粉虫(Tenebrio molitor)又叫面包虫，在昆虫分类学上隶属于鞘翅目，拟步行虫科，粉甲虫属(拟步行虫属)，属于农业仓储害虫。随着仓储条件的改善，自然发生的黄粉虫害已经消失。由于黄粉虫蛋白质含量高，并且富含多种生物活性物质，近年来多家企业启动开发黄粉虫在饲料、食品和医药保健品等方面的用途。黄粉虫高密度饲养过程中，易发生软腐病，该病为消化道感染细菌所致，表现为虫体发黑，传染性强，死亡率高，无有效治疗方法。在饲料中添加抗生素可以降低发病率。但长期添加抗生素，不仅使耐药菌株越来越多，而且影响黄粉虫体内正常菌群，导致免疫功能下降；此外，抗生素残留也降低黄粉虫产品质量。益生菌发酵物可以作为饲料添加剂替代抗生素，是解决上述问题的理想方案。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种用于饲喂黄粉虫的菌剂。

本发明提供的菌剂，其活性成分为两歧双歧杆菌(Bifidobacterium bifidum)、丁酸梭菌(Clostridium butyricu)、地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)和枯草芽孢杆菌枯草亚种(Bacillus subtilis subsp.subtilis)。

上述菌剂的有效总活菌数大于等于10⁸CFU/mL；其中，所述两歧双歧杆菌、所述丁酸梭菌、所述地衣芽孢杆菌和所述枯草芽孢杆菌枯草亚种的有效活菌数的比例为1：1.25：1.25：1.5。

上述菌剂的有效总活菌数为10¹⁰CFU/mL、10¹¹CFU/mL、10¹⁴CFU/mL或10¹⁵CFU/mL；

所述两歧双歧杆菌(Bifidobacterium bifidum)为两歧双歧杆菌(Bifidobacterium bifidum)CGMCC NO.1.5091、所述丁酸梭菌(Clostridium butyricu)为丁酸梭菌(Clostridium butyricu)CGMCC NO.1.336、所述地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)CGMCC NO.1.813、所述枯草芽孢杆菌枯草亚种(Bacillus subtilis subsp.subtilis)为枯草芽孢杆菌枯草亚种(Bacillus subtilis subsp.subtilis)CGMCC NO.1.1731。

本发明的另一个目的是提供一种制备菌剂的方法。

本发明提供的方法，为如下1)或2)：

1)包括如下步骤：将两歧双歧杆菌(Bifidobacterium bifidum)、丁酸梭菌(Clostridium butyricu)、地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)和枯草芽孢杆菌枯草亚种(Bacillus subtilis subsp.subtilis)种子液混匀，接种到固态发酵培养基中，发酵培养，收集发酵产物，即得到菌剂；

所述固态发酵培养基由固态基质和含有生长因子的MRS液体培养基按照1g：0.5mL的比例混合，得到的固态发酵培养基；

所述固态基质为玉米糠、豆粕、豆渣(榨豆浆后的残渣)或麦麸；所述固态基质具体为麦麸；