[发明专利]一种百合种球综合性脱毒方法

权利要求书

1.百合种球综合性脱毒方法，其特征在于，包括以下步骤：

A、外植体生长点的剥取：选优质种球，用浓度为20～40%的多菌灵600倍溶液浸泡30分钟；将消过毒的泥炭用水拌湿，使其含水量为46～66%，备用；再将多菌灵浸泡后的种球种在拌湿的基质中，每箱下种20～26个种球，浇定根水，然后将泡过种球的多菌灵溶液洒在表面；按切花种植方法正常管理，保持基质46～66%的水分；在温度为21～23℃，湿度为70～80%，光照强度1600～2000Lx，光照时间8～12h/d的条件下，经过6～7天后，芽长到6～6cm时进行热处理脱毒；

B、热处理脱毒：将温度控制在36～38℃之间，湿度为70～86%，光照强度1600Lx，光照时间8～12h/d的环境条件下，经过7～16天培养，芽长高并绽开成莲座状；

C、外植体清洗消毒：①用清水冲洗后，剥去部分叶片，用中性肥皂水洗6分钟，用纱布

包好，清水冲洗12小时；②用浓度为0.1%的升汞浸泡8分钟；③再用浓度为76%的酒精浸泡8～16秒；④吐温80无菌水浸泡2～3分钟；⑤再用无菌水洗6～7遍至无泡沫；

D、生长点采集诱导培养：采集长度为0.3～0.6mm的百合茎尖生长点接种到诱导培养基中培养，温度21～23℃，光照强度1600～3000Lx，光照时间8～12h/d，培养40～60天后,生长点膨大成直径2～3cm的叶丛，所述诱导培养基为：1／2MS+BA2.6～6mg/L+NAA0.26mg/L+糖40g/l+琼脂6.6g/L；

E、脱毒培养：将诱导出的叶丛切成0.6cm小块，接种于脱毒培养基中，脱毒培养基为：

MS+NAA0.2mg/L+0.4%糖+活性炭0.6%+病毒唑6mg/L+琼脂6.0g/L，在温度为21～23℃，光照时间为8～12h/d，光照强度为2000～3000Lx的环境条件下，经过40～60天培养，形成带球的瓶苗；

F、病毒检测：将瓶苗采用RT-PCR检测法检测，经检测确认无任何病虫害现象，并不带百合无症病毒、黄瓜花叶病毒和百合斑驳病毒，即为百合脱毒种，步骤A是用浓度为40%

的多菌灵600倍溶液浸泡种球30分钟，步骤D是采集长度为0.3～0.4mm的百合茎尖生长点接种到诱导培养基中培养，步骤D是采集长度为0.3～0.4mm的百合茎尖生长点接种到诱导培养基中培养。

2.根据权利要求1所述的百合种球综合性脱毒方法，其特征在于，步骤E中病毒唑的添加方法如下：

a.用无菌蒸馏水配制好浓度为0.2mg/ml的病毒唑母液；

b.将无菌注射器的针头换成直径小于0.2纳米的滤筛，用带滤筛的无菌注射器吸取病毒唑母液；

c.将高温灭菌后的培养基：MS+NAA0.2mg/L+0.4%糖+活性炭0.6%+琼脂6.0g/L，冷至36～40℃时，吸取病毒唑母液，按6mg/L用量添加后摇匀，分装入无菌瓶中，待冷却凝固后用于药物脱毒接种。