[发明专利]慢性乙型和丁型肝炎病毒肝细胞受体编码基因SLC10A1的新突变蛋白、编码基因及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物工程以及医学技术领域，具体涉及到一种慢性乙型和丁型肝炎病毒肝细胞受体编码基因SLC10A1的新突变蛋白、编码基因及其应用。 

背景技术

慢性乙型病毒性肝炎是由乙型肝炎病毒（HBV）感染而引起的以肝脏损害为主要表现的传染性疾病，是关系到我国乃至全球公共卫生的重大疾病。乙肝病毒通过乙肝病毒肝细胞受体进入肝细胞从而引发感染，因此该受体发生变异会干扰乙肝病毒与其发生结合，从而阻止乙肝病毒进入肝细胞。而且丁肝病毒和乙肝病毒共用同一肝细胞受体，因此慢性乙型肝炎病毒肝细胞受体变异也有阻止丁肝病毒进入肝细胞的作用。 

发明内容

本发明的目的是提供慢性乙型和丁型肝炎病毒肝细胞受体编码基因SLC10A1的突变株及其突变蛋白在乙肝、丁肝及相关肝衰竭的预防和治疗上的应用。 

    本发明要求保护的内容是以慢性乙型和丁型肝炎病毒肝细胞受体的编码基因SLC10A1的突变基因及其编码的突变蛋白作为研究基础，在乙型病毒性肝炎及丁型病毒性肝炎及其相关肝衰竭的预防和治疗的应用中产生的任何新药物和新方法 

    一种慢性乙型和丁型肝炎病毒肝细胞受体的编码基因SLC10A1的突变蛋白，是在慢性乙型和丁型肝炎病毒肝细胞受体的编码基因SLC10A1蛋白的氨基酸序列的第267位由丝氨酸突变为苯丙氨酸，本发明中用p.Ser267Phe 表示。所述慢性乙型及丁型肝炎病毒肝细胞受体的编码基因SLC10A1的突变蛋白，氨基酸序列如SEQ ID NO:1 所示。

    上述慢性乙型和丁型肝炎病毒肝细胞受体的编码基因SLC10A1的突变蛋白的编码基因，该编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:2 所示。 

    慢性乙型和丁型肝炎病毒肝细胞受体的编码基因SLC10A1的突变蛋白在制备慢性乙型病毒性肝炎的检测试剂中的应用。 

    慢性乙型和丁型肝炎病毒肝细胞受体的编码基因SLC10A1的突变蛋白的编码基因在制备慢性乙型病毒性肝炎的检测试剂中的应用。 

    由慢性乙型和丁型肝炎病毒肝细胞受体的编码基因SLC10A1的突变蛋白及突变蛋白的编码基因制备慢性乙型病毒性肝炎的检测试剂方案如下所示： 

   一种慢性乙型或丁型病毒性肝炎检测试剂盒，由以下成分组成：引物（引物核苷酸序列如SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示），PCR反应液，PCR产物纯化盒和测序反应液。所述PCR反应液为溶解了Tag DNA 聚合酶、dNTPs、镁离子（如MgCl₂）、PCR 反应缓冲液（如10×Taq Buffer）。以上试剂均可直接购买相应商品，如（10mM）dNTPs购自上海生工生物工程技术服务有限公司；Tag DNA聚合酶及其配套的10×Taq Buffer、MgCl₂购自Fermentas公司。各试剂的用量及浓度均为本领域常规值，如1u/μL Tag DNA 聚合酶1μL、2mmol/L的dNTP（即浓度均为2mmol/L 的4 种dNTP 的混合物）3μL、25mmol/L MgCl₂3μL、10×Taq  Buffer（内含(NH4)₂SO₄）3μL、灭菌ddH₂O 17μL。

    所述PCR产物纯化盒为纯化PCR产物的溶液和DNA 吸附柱Labell ； 

    所述纯化PCR产物的溶液为：1u/μL 虾碱性磷酸酶（SAP，可购于Fermentas 公司）0.6μL、20u/μL 外切酶（Exo I，可购于Fermentas 公司）0.15μL 和灭菌ddH₂O 1.25-1.75μL，或按上述比例配制的其他体积的混合液。纯化PCR 产物的溶液优选2-2.5μL。

    所述测序反应液为BigDye（购自ABI 公司）和5×Sequence buffer（购自ABI公司）的混合液，BigDye 和5×Sequence buffer 的体积比优选为1:2，如1μLBigDye 与2μL5×Sequence buffer 混合。上述慢性乙型病毒性肝炎检测试剂盒，优选的引物核苷酸序列如SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示，引物浓度都为3.2μmol/L。