[发明专利]一种生产表阿霉素的方法

说明书

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体涉及到一种表阿霉素的生产方法。

背景技术

蒽环类抗生素用于抗肿瘤治疗已经超过三十年，成为应用最广泛的抗肿瘤抗 生素。表阿霉素与阿霉素是同分异构体，它们的抗肿瘤活性相当，但是表阿霉素 的毒性更小。同时随着新剂型、同其它抗肿瘤药物的新组合应用使得表阿霉素在 临床上的应用范围越来越广泛，在市场上比阿霉素更有竞争力。

表阿霉素通常通过化学合成得到。专利US5874550披露了一种表阿霉素的 合成方法，首先通过发酵得到柔红霉素，然后将柔红霉素4号位的羟基氧化成酮 基，再将这个酮基立体特异性地还原得到表柔红霉素，通过表柔红霉素最终合成 得到表阿霉素。专利US20070142309A1披露了以13-dihydrodaunorubicine为起 始原料的合成表阿霉素的合成方法。

然而化学合成过程复杂，成本高，反应条件要求严格；同时生产过程中大量 使用溶剂，容易对环境造成污染。这些因素制约着表阿霉素的大规模生产与应用。 而专利US20110171691A1披露了一种将13-dihydro-epi-daunorubicin转化为表阿 霉素的方法，但是转化率不到10％。因此发明新的生物转化方法，提高表阿霉素 的转化效率以适合大规模商业化生产具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种生产表阿霉素的方法，所述的方法包括如下步 骤：将有阿霉素生产能力的链霉菌培养后，收集湿菌丝体，湿菌丝体和表柔红霉 素在缓冲液中，将表柔红霉素生物转化为表阿霉素。

在优选的实施方案中，其中所述的有阿霉素生产能力的链霉菌优选自链霉菌 (Streptomycessp.)H323，其保藏编号为CGMCCNO.4827；链霉菌(Streptomyces peucetiussubsp.caesius)，其保藏编号为ATCCNo.27952；链霉菌(Streptomyces peucetius)，其保藏编号为ATCCNo.29050。

在优选的实施方案中，其中所述缓冲液的pH值优选为5.0-8.0，更优选为 6.0-7.0，最优选为6.5。

在优选的实施方案中，其中所述生物转化的转化温度优为20-40℃，更优选 25-33℃，最优选为28-30℃。

在优选的实施方案中，其中所述生物转化的转化时间优为10-100小时，更 优选为24-100小时。

本发明所述的缓冲液是采用常规方法配制的，在优选的实施方案中，其中所 述缓冲液中的盐选自磷酸盐，柠檬酸盐。

在优选的实施方案中，其中所述缓冲液优选但不限于磷酸氢二钠-磷酸二氢 钠缓冲液，磷酸二氢钾-氢氧化钠缓冲液，柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液。

在优选的实施方案中，所述湿菌丝体质量与缓冲液的体积比优选为1:1— 1:100，更优选为1:5—1:10，单位为g/ml。

在优选的实施方案中，其中所述表柔红霉素质量与缓冲液的体积比优选为 10:1—200:1，更优选为10:1—100:1，单位为μg/ml。

在本发明的实施方案中，有阿霉素生产能力的链霉菌可采用常规的方法进行 培养，例如液体培养等，并可以采用常规的方法进行收集湿菌丝体，例如离心等。

本发明中所述的表柔红霉素可经常规的发酵制备方法得到，例如参考文献 KrishnamurthyMadduri,JonathanKennedy,GiovanniRivola,Productionofthe antitumordrugepirubicin(4'-epidoxorubicin)anditsprecursorbyagenetically engineeredstrainofStreptomycespeucetius,NatureBiotechnology,1998,16,69-74 的方法，或者表柔红霉素可经常规的化学合成制备得到，例如可参考专利 US4345068的方法。

本发明表柔红霉素和表阿霉素检测方法如下：

色谱柱为C18柱，5μm，4.6×250mm；

流动相：缓冲液∶乙腈∶甲醇＝500∶500∶60；

缓冲液：取十二烷基硫酸钠1.44g和磷酸0.68ml溶于500ml超纯水中；

流速：1.35ml/min；