[发明专利]一种获取SPF五指山小型猪的方法

说明书

技术领域：

本发明属于实验动物学实验动物标准化领域，具体涉及一种获取SPF五指山小型猪的方法。

背景技术：

犬和非人灵长类动物在生物医学非啮齿类动物研究中一直占据主要地位，但随着动物福利和“3R”原则的推广，犬和非人灵长类动物逐渐不再适合作为实验动物使用。而猪由于是一种肉用动物，且在药物动力学、生理学、生物化学和解剖学等多个方面和人类非常接近，因此非常适合用于生物医学研究。其中小型猪由于体小，利于饲养、管理和遗传控制，被认为是一种非常好的可以替代犬和非人灵长类动物的大型实验动物，已经广泛应用于皮肤烧伤、肿瘤、免疫学、心血管疾病、营养学、器官移植、遗传疾病等生物医学研究的各个方面。

无特定病原体(Specific pathogen Free,SPF)动物是指机体内无特定的微生物和寄生虫存在的动物，是目前国外使用最广泛的实验动物。我国早在“九五”实验动物发展的若干意见中就提出，2000年全国基本普及清洁级实验动物，重点科研项目使用的实验动物要达到SPF级水平。目前大小鼠等小型啮齿类动物已经实现普及清洁级实验动物，主要科研项目都开始使用SPF实验动物。而现在国内实验用小型猪一般都是普通饲养，本身携带许多病原体，微生物状态复杂，很难符合实验动物的微生物学和寄生虫学控制等方面要求，加之暴露于众多病原生物的普通环境中，作为医学实验动物会产生不良甚至严重后果。因此，有必要开展SPF猪培育研究，以满足生物医学对高质量实验用猪的需求。

净化猪群病原的常用方法有药物治疗性早期断奶技术(MEW)、隔离早期断奶技术(SEW)、胚胎移植和无菌剖腹产等，这几种方法都有各自的特点。MEW技术的原理是在一个有效防疫的猪群中，仔猪由于母源抗体的存在并不会立即感染所有的病原，通过对产前5d至产后5d和产后10到20日龄的仔猪进行药物控制(抗生素)，并早期断奶隔离饲养，就可以避免仔猪受到许多病原微生物的感染。SEW技术的原理是母猪产前得到有效免疫，仔猪出生后通过初乳可以获得较高的被动免疫，在被动免疫消失之前及时将仔猪和母猪隔离饲养就可以减少甚至隔绝病原微生物对仔猪的影响。MEW和SEW技术可以控制许多病原的感染，方法简单、生产成本较低，但也存在一些缺点，如母源性疾病净化不彻底，还有再度感染的危险，另外由于哺乳期的缩短，可能影响部分仔猪的生长发育，尤其是部分体重较小的仔猪难以处理。胚胎移植技术可以维持繁殖母猪的繁殖性能，获得较好的净化状态，但是由于技术复杂、胚胎收集方法容易导致母猪子宫粘连、胚胎不宜长期保存等原因，目前在培育SPF猪方面应用并不广泛。无菌剖腹产目前仍是应用最普遍、成熟、有效的获得SPF动物的方法，该方法包括两种形式，一种是子宫切开，母猪可以重复利用，但技术条件要求较高，有污染的可能性；二是子宫直接摘除，母猪只能利用一次，但操作相对简便，对病原的控制比较彻底，可以隔绝绝大部分的病原感染。

发明内容：

本发明的目的是提供一种获取SPF五指山小型猪的方法，利用该方法能够减轻剖腹产麻醉过程中麻醉药对猪胎儿的影响，使仔猪能够正常复苏，提高仔猪存活率，保证剖腹产的顺利实施，为高效的获取SPF五指山小型猪创造了条件。

本发明的获取SPF五指山小型猪的方法，包括猪群病原监测及种猪选择、麻醉、剖腹产、隔离器饲养、屏障环境饲养和病原生物学监测，其特征在于，所述的麻醉为：怀孕母猪在妊娠期末期进行手术，先肌肉注射麻醉，母猪麻醉后消毒传入手术室，将五指山小型猪母猪俯卧于手术台上；对母猪进行气管插管，插管完成后将母猪仰卧保定于手术台上，并开始静脉滴注质量分数5％葡萄糖生理盐水；注射麻醉大概可以维持3-3.5h，然后观察母猪出现眼皮眨动、尾巴晃动等变化时，立即上麻醉呼吸机，异氟烷先调为2-2.5μg/ml持续10-20min，使母猪安静，然后设为0.5-1μg/ml使母猪维持麻醉状态，其他设定指标如下：潮气量200-300ml，呼吸次数15-20次，氧分压20Pa左右，大概在注射麻醉药后4.5-5h左右猪胎儿复苏，观察有没有出现胎动，如有胎动则开始剖腹产手术，手术前先将异氟烷调为2-2.5μg/ml，并维持20min。

所述的肌肉注射麻醉，用肌肉注射麻醉药质量分数3％戊巴比妥钠0.4mL/kg体重、速眠新Ⅱ0.1mL/kg体重、阿托品2mL作前驱麻醉，如母猪未倒下，则加注质量分数3％戊巴比妥钠直至倒下，母猪倒下后消毒运入手术室。

本发明的方法利用母猪代谢麻醉药，以减轻剖腹产麻醉过程中麻醉药对猪胎儿的影响，使仔猪能够正常复苏，提高仔猪存活率，同时结合气体麻醉保证剖腹产的顺利实施。