[发明专利]结核分枝杆菌特异性CD8+T细胞表位肽P45及其应用

说明书

技术领域

本发明属于免疫学技术领域，特别涉及结核分枝杆菌特异性CD8⁺T细胞表位肽及其应用。

背景技术

结核病是由结核分枝杆菌感染后诱发、全球感染率最高的传染病，病死率仅次于艾滋病。仅2012年，全球新发结核病患者达860万，死亡130万。结核病疫情的新特点在于：耐药结核病例出现并呈蔓延之势；结核与艾滋病共感染情况愈演愈烈。针对这两类患者，目前并无有效的防治措施。中国是世界上结核病负担最重的国家之一，研发适合中国人群的结核病疫苗和治疗药物已时不我待。

结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis，MTB)是胞内寄生菌，对其有效控制主要依赖于细胞免疫，尤其是T细胞免疫。人体内T细胞主要分为CD4⁺T(Th)细胞和CD8⁺T(CTL)细胞两大亚群，大量研究已经证明，这两种T细胞亚群对于控制结核菌感染都具有重要作用，其中CD8⁺CTL更是清除结核菌的主力军。

T细胞无法识别完整的结核菌和蛋白抗原，而是识别经过抗原递呈细胞摄取和加工后释放出的结核表位肽。表位肽是抗原中引起免疫应答的核心部份，也称为抗原决定簇，它与抗原递呈细胞表面的HLA分子结合形成肽-HLA复合物并被递送和表达在抗原递呈细胞表面，进而活化T细胞，诱发T细胞免疫反应。CD4⁺T细胞识别HLA II类分子递呈的表位肽，而CD8⁺T细胞识别HLAI类分子递呈的表位肽。T细胞对表位肽的识别及其活化要求表位肽与抗原递呈细胞表面HLA分子稳定结合，而肽与HLA分子的亲和力是形成肽-HLA复合物的关键，因此制备诱发T细胞免疫的治疗药物和疫苗，首要步骤是筛选出高亲和力的肽，进而鉴定出具有免疫活性的表位肽。

表位肽可以完全通过人工合成获得，研发周期短；由于剔除了表位肽以外病原体其他有害成分，安全性良好；还可以将多个表位肽串联使用，加强免疫效果和减少免疫逃逸。目前已知的结核菌CTL表位肽主要是在欧美人群中鉴定，多为HLA-A*0201限制性，而对于结核病流行最严重的非洲和东南亚人群，并没有合适的表位肽可使用。在中国，HLA-A*1101是 人群中基因频率最高的HLA分子，鉴定HLA-A*1101限制性CTL表位对于研发适合中国人群的表位肽疫苗具有非常重要的意义。

发明内容

本发明的目的在于提供结核分枝杆菌特异性CD8⁺T细胞表位肽。

本发明的另一目的在于提供该结核分枝杆菌特异性CD8⁺T细胞表位肽在制备结核病疫苗、诊断试剂和治疗药物中的应用。

本发明所采取的技术方案是：

本发明提供了与HLA-A*1101分子亲和力高，能活化CD8⁺T细胞、诱导其增殖和分泌IFN-γ的结核分枝杆菌特异性CD8⁺T细胞表位肽，所述表位肽的氨基酸序列为：RLIPFAAPPK(SEQ ID NO.45)(即：Arg-Leu-Ile-Pro-Phe-Ala-Ala-Pro-Pro-Lys)。

本发明结合生物信息学预测方法和紫外诱导肽置换实验，利用结核分枝杆菌自身的抗原筛选出具有抗结核活性的表位肽，高效准确地检测出表位肽RLIPFAAPPK(SEQ ID NO.45)与HLA-A*1101分子之间的亲和力。这是新的、未被报道过的HLA-A*1101限制性结核分枝杆菌表位肽，被结核病人CD8⁺T细胞广泛识别。由于HLA-A*1101基因型是中国人中最广泛携带的基因型，目前并未发现结核分枝杆菌特异的HLA-A*1101限制性CTL表位肽，本发明表位肽的确定，为结核病疫苗、诊断试剂和治疗药物的研发提供了理论基础和新的解决方案，对结核病的防治具有重大意义。

附图说明

图1为候选表位肽与HLA-A*1101分子亲和力示意图。

图2为22条高亲和力的表位肽诱导结核患者T细胞活化并分泌IFN-γ的示意图。

图3为ELISPOT检测P45诱导结核患者T细胞分泌IFN-γ的示意图。

图4为P45的质谱分析图。

图5为CFSE标记的淋巴细胞增殖实验检测P45诱导结核患者CD8⁺T细胞增殖的结果示意图。

具体实施方式