[发明专利]一种提高金藻DHA含量的培养方法

说明书

本发明公开了一种提高金藻DHA含量的培养方法。在金藻光自养培养过程中加入终浓度为0.5～8.0％(v/v)的甘油，提高藻细胞DHA占总脂肪酸的比例，藻细胞DHA量较未添加甘油组均有所提高，最高可提高45％以上。本方法简单易行，并且在添加甘油的培养体系的藻细胞内多不饱和脂肪酸的量也有很大提升。

技术领域

本发明属于海洋生物技术领域，具体涉及金藻及金藻细胞DHA占总脂肪酸的比例。

背景技术

二十二碳六烯酸(Docosahexaenoic acid，简称DHA)是一种重要的ω—3型高碳多不饱和脂肪酸，也是动物和人体不能合成而必须由食物提供的一种必需脂肪酸。是维持大脑、视网膜等正常生长和功能发育的必需脂肪酸，还具有降血脂、抗血栓和抗动脉粥样硬化等作用。

微藻中含有大量的DHA，且其它长链不饱和脂肪酸的含量较低，利于DHA的分离纯化。由于微藻的培养受季节和地域的影响较小，借助于生物反应器可实现常年工亚化大规模培养，而且微藻中的脂肪组成不像鱼油那么复杂，使得微藻DHA的分离纯化工艺相对简单，所得DHA产品无鱼腥味和其它异味，只有独特的海藻味，并无不良化学成分。利用海洋微藻培养生产的DHA可做到不含EPA和污染物，所以质量好，可以广泛使用于各类食品中。尤其是可以用于鱼油来源DHA所不能用的领域(例如孕妇、哺乳期妇女和婴幼儿保健品和食品)。目前，微藻来源的DHA产品在发达国家供不应求，价格也高于鱼油来源DHA。

以湛江等鞭金藻为例，湛江等鞭金藻是一种分布广泛的海洋浮游单细胞藻类个体小，繁殖快，具无纤维素的细胞壁，营养丰富，尤其在藻体中富含多不饱和脂肪酸(poly-unsaturated fatty acid，PUFAs)，是海洋中鱼、虾和贝类的等幼体生长发育过程中必需的营养成分。此外，近年来的研究证明，n-3PUFAs还具有防治人类心血管疾病，促进婴幼儿大脑发育和改善视力的功效。所以它作为一种优质的PUFAs海洋生物资源，有很好的应用前景。因此，寻找一种提高藻细胞内DHA占总脂肪酸比例的培养方式是十分必要的。

发明内容

本发明的目的在于在限氮培养体系中添加辅助碳源甘油，提高金藻DHA占总脂肪酸的比例的培养方法。

为了实现上述目的，本发明采用的培养方法包括以下步骤：

1)藻种培养于锥形瓶中，培养至指数生长期使用；

2)将指数生长期的藻细胞接种于灭菌的F/2培养基中，添加甘油培养至平台期收获藻细胞；

3)脂肪酸成分分析：将收获的藻细胞烘干得藻粉，采用酸催化转酯化法，气质联用方法对金藻脂肪酸成分进行测定(参考文献：[1]冯迪娜,艾江宁,刘亚男,等.含氮类培养基对海洋微藻Isochrysis zhanjiangensis油脂与碳水化合物积累的影响[J].中国生物工程杂志,2011,10:29-34.)。

培养参数：

1)氮限制培养是指接种时使用3x F/2培养基，即磷源、金属元素、微量元素各添加常规F/2的3倍；

2)添加甘油的时间为接种时添加或指数生长期添加；

3)添加0.5～8.0％(v/v)的甘油，根据初始接入细胞浓度，按照8～16pg/cell(以硝酸钠计)的比例调整初始氮源浓度；

4)培养温度23～27℃，光强110～150μmol.m^-2s^-1，光暗比为14h：10h，通入含4.0％CO₂的空气，通气速率0.1～0.3vvm。

本发明的优点如下：

1、DHA含量明显高：本发明所得到的藻细胞DHA含量有显著提高，DHA含量最高位16.0％，比未添加甘油培养体系的藻细胞提高45％以上。