[发明专利]一种提高尼莫克汀产量的方法

说明书

本发明提供一种提高尼莫克汀产量的方法，其以保藏编号为CGMCC No.8731的蓝灰链霉菌(Streptomyces cyaneogriseus)BJX003作为生产菌株，进行尼莫克汀的发酵生产，当发酵液中还原糖的浓度低于12‑18g/L时，补加含有黄豆饼粉的葡萄糖溶液，并将还原糖的浓度控制在12‑18g/L；其中补料液中葡萄糖的浓度为300‑400g/L，黄豆饼粉的浓度为75‑125g/L。采用本发明方法可使尼莫克汀产量从3200μg/mL左右提高至3400μg/mL左右。

技术领域

本发明涉及微生物发酵领域，具体地说，涉及一种提高尼莫克汀产量的方法。

背景技术

有机化学农药发明于上世纪四十年代，它的出现极大地增强了人类控制病虫危害的能力，为挽回农作物产量损失作出了重大贡献，但是，有机化学农药普遍毒性较高、安全性低、对环境影响大，它的长期和大量使用已经带来了众所周知的环境污染、生态破坏和食品安全等一系列问题，严重影响了农业经济的可持续发展。在过去的十几年里，各国先后不同程度地减少了化学农药的用量，2003年12月欧盟正式禁止320种农药在欧盟的销售，其中涉及中国的达60多种，有氧乐果、三胜磷、甲氧菊酯、丙溴磷、稻瘟灵、恶双灵等化学合成的高毒性品种，2004年中国农业部发布公告：自本年6月30日起，不得在市场上销售含甲胺磷、对硫磷、甲基对硫磷、久效磷和磷铵5种高毒有机磷农药的复配产品。随着高毒化学农药逐步退出市场，生物农药的研究与应用得到了广泛关注。与化学农药相比，生物农药具有杀虫机制新颖，环境残留低，对人畜更安全等优点，是未来有害生物综合防治的理想绿色农药。

尼莫克汀(Nemadectin)是十六元大环内酯类抗生素，属于米尔贝霉素家族，以尼莫克汀为基础半化学合成的莫西克汀(Moxidectin)在驱线虫和杀寄生虫方面有着优良效果，是目前最有前途的广谱、高效、新型、无交叉感染的生物杀虫剂，被誉为当今活性最高的杀虫剂之一。该化合物由蓝灰链霉菌(Streptomyces cyaneogriseus sp.Noncyanogenus)发酵产生，分子式为C₃₆H₅₂O₈，分子量为612.8，纯品为白色粉末，关于此药物在国外已有较多报道，而国内研究才刚刚起步，市场潜力巨大。

发明内容

本发明的目的是提供一种提高尼莫克汀产量的方法。

为了实现本发明目的，本发明的一种提高尼莫克汀产量的方法，以保藏编号为CGMCC No.8731的蓝灰链霉菌(Streptomyces cyaneogriseus)BJX003作为生产菌株，进行尼莫克汀的发酵生产，当发酵液中还原糖的浓度低于12-18g/L时，补加含有黄豆饼粉的葡萄糖溶液，并将还原糖的浓度控制在12-18g/L；其中补料液中葡萄糖的浓度为300-400g/L，黄豆饼粉的浓度为75-125g/L，以水配制。

本发明提供的蓝灰链霉菌(Streptomyces cyaneogriseus)BJX003，现已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101，保藏编号CGMCC No.8731，保藏日期2014年1月17日。

前述的方法，发酵使用的发酵培养基为：葡萄糖40-60g/L、乳糖20-50g/L、酵母粉20-50g/L、磷酸氢二钾1-3g/L、七水硫酸镁0.5-2g/L、氯化钠8.5-12.5g/L和碳酸钙10-30g/L，pH值7.2，以水配制。

优选地，发酵培养基为：葡萄糖50g/L、乳糖35g/L、酵母粉35g/L、磷酸氢二钾2g/L、七水硫酸镁1.2g/L、氯化钠10g/L和碳酸钙20g/L。

发酵的条件为：26-30℃，转速150-220rpm，通气比1:0.3-0.7，罐压0.03-0.04MPa，溶氧控制在40％以上，发酵周期为192-264hr。

本发明具有以下优点：